腺病毒介导的Rb94基因联合γ-辐射抑制人恶性肿瘤细胞生长的研究的开题报告一、研究背景和意义恶性肿瘤是一种常见的致死性疾病，针对肿瘤的治疗一直是医学研究的重点。传统的手术、化疗和放疗等治疗方法都存在一些副作用和限制。因此，基于分子生物学和基因工程技术的新治疗方式是发展方向之一。在新治疗中，基因治疗迅速发展，并成为一种新的治疗方式。腺病毒作为一种天然的病毒载体，可以用于传递外源基因。目前，研究人员已经利用腺病毒进行了多种基因治疗方案的研究。而Rb94基因被证明是人类肿瘤细胞增殖和代谢的关键调控基因之一。通过腺病毒介导的基因治疗，可以实现对恶性肿瘤细胞的特异性杀伤和治疗。此外，γ-辐射作为一种常见的肿瘤治疗方法，可以实现对恶性肿瘤细胞的杀伤。通过将腺病毒介导的Rb94基因与γ-辐射联合应用，可以进一步提高治疗效果。因此，本研究旨在探究腺病毒介导的Rb94基因联合γ-辐射对恶性肿瘤细胞生长的影响及其机制，为肿瘤治疗提供新思路和新方法。二、研究方案1.实验对象采用人类肝癌细胞株HepG2作为实验对象。2.实验设计将HepG2细胞分为四组：空白对照组、单独腺病毒介导的Rb94基因组、单独γ-辐射组和联合治疗组。联合治疗组分为两个亚组：γ-辐射与Rb94基因同时作用组和γ-辐射后再接种腺病毒介导的Rb94基因组。3.实验方法（1）实现腺病毒介导的Rb94基因利用基因工程技术，在腺病毒表达载体中克隆Rb94基因序列，构建重组腺病毒载体。（2）细胞株培养将HepG2细胞培养于96孔板中，在37℃，5%CO2条件下进行培养。（3）腺病毒感染向各组细胞中添加适量的腺病毒，使细胞达到感染状态。（4）γ-辐射将各组细胞放射线源下进行合适剂量的γ-辐射处理。（5）MTT法检测细胞增殖情况采用MTT法检测细胞增殖情况，测定细胞生长曲线并计算细胞抑制率。（6）Westernblot检测Rb94表达情况采用Westernblot技术检测Rb94在细胞中的表达情况，并分析其与γ-辐射的协同作用机制。三、预期结果（1）腺病毒介导的Rb94基因能够特异性地靶向HepG2细胞。（2）γ-辐射可使HepG2细胞凋亡增加。（3）联合治疗组中的HepG2细胞增殖能力显著低于单独γ-辐射组和单独腺病毒介导的Rb94基因组，说明联合治疗可以增强治疗效果。（4）联合治疗组中Rb94的表达量将显著高于单独腺病毒介导的Rb94基因组，说明γ-辐射可以增强Rb94的表达。四、结论腺病毒介导的Rb94基因联合γ-辐射可以有效地抑制肝癌细胞HepG2的生长和增殖，治疗效果优于单一治疗。该研究为肿瘤治疗提供了一种新途径。