RNAi介导抑制MCF-7细胞中VEGF基因表达的开题报告背景：VEGF是肿瘤细胞分泌的重要因子，具有促进肿瘤生长、血管生成和迁移的作用，在肿瘤治疗中受到广泛关注。RNA干扰（RNAi）技术可以特异地沉默目标基因的表达，从而抑制其功能。本实验旨在探究RNAi技术介导VEGF基因的抑制在MCF-7细胞中是否可行，以及对细胞的影响。实验设计：实验设计分为两个部分，第一部分是抑制VEGF基因表达，并检测其对MCF-7细胞生长和凋亡的影响；第二部分是检测VEGF蛋白的表达水平和分泌量的变化。实验步骤：1.设计VEGFsiRNA序列，合成并纯化siRNA；2.将MCF-7细胞平均分为三组：1）阴性对照组，转染scrambledsiRNA；2）阻遏组，转染VEGFsiRNA；3）对照组，不进行转染处理。3.利用逆转录PCR检测VEGFmRNA表达水平，Westernblotting检测VEGF蛋白表达水平，ELISA检测VEGF分泌量，在10、20、30、40、50、60h后分别进行检测。4.利用MTT法检测细胞增殖情况，AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况。5.统计数据并进行相关分析。预期结果：预计在转染VEGFsiRNA的组别中，可显著抑制VEGFmRNA和蛋白的表达，并降低VEGF的分泌量，表明VEGFsiRNA的介导抑制效果显著。同时，由于VEGF在MCF-7细胞中是一个非常重要的生长因子，因此预计VEGF的抑制会产生不利的影响，如减缓细胞增殖，并促进细胞凋亡，这些结果将通过MTT法和AnnexinV/PI双染法进行验证。意义：探究siRNA介导的基因沉默技术对于肿瘤生长和发展的影响，为开发基于RNAi技术的肿瘤治疗提供实验基础。并且，此实验结果有望为肿瘤治疗提供新的思路和方法。