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会计学台式高、超速离心机0.6-10万转/分1.常速离心机高速离心机的转速为1×104~2.5×104r/min。相对离心力达1×104~1×105g,主要用于分离各种沉淀物、细胞碎片和较大的细胞器等。为了防止高速离心过程(guòchéng)中温度升高而使酶等生物分子变性失活,有些高速离心机装设了冷冻装置,称高速冷冻离心机。3.超速离心机二、离心分离方法(fāngfǎ)的选择举例(jǔlì):2.密度(mìdù)梯度离心密度(mìdù)梯度离心是样品在密度(mìdù)梯度介质中进行离心,使密度(mìdù)不同的组分得以分离的一种区带分离方法。密度(mìdù)梯度系统是在溶剂中加入一定的梯度介质制成的。梯度介质应有足够大的溶解度,以形成所需的密度(mìdù),不与分离组分反应,而且不会引起分离组分的凝聚、变性或失活。常用的有蔗糖、甘油等。使用最多的是蔗糖密度(mìdù)梯度系统,其梯度范围是:蔗糖浓度5%~60%,密度(mìdù)1.02~1.30g/cm3。密度(mìdù)梯度的制备可采用梯度混合器,也可将不同浓度的蔗糖溶液,小心地一层层加入离心管中,越靠管底,浓度越高,形成阶梯梯度。离心前,把样品小心(xiǎoxīn)地铺放在预先制备好的密度梯度溶液的表面。离心后,不同大小、不同形状、有一定的沉降系数差异的颗粒在密度梯度溶液中形成若干条界面清楚的不连续区带。各区带内的颗粒较均一,分离效果较好。在密度梯度离心过程中,区带的位置和宽度随离心时间的不同而改变。随离心时间的加长,区带会因颗粒扩散而越来越宽。为此,适当增大离心力而缩短离心时间,可以减少区带扩宽。3.等密度离心将CsCl2、CsSO4等介质溶液与样品溶液混合,然后在选定的离心力作用(zuòyòng)下,经足够时间的离心,铯盐在离心场中沉降形成密度梯度样品中不同浮力密度的颗粒在各自的等密度点位置上形成区带。常用来分离提取核酸、亚细胞器和质粒。三、离心条件(tiáojiàn)的确定1.离心力物质颗粒在离心场中所受到的离心力(Fc)的大小,决定于颗粒的质量(m)和离心加速度(αc):Fc=mαc离心加速度的大小取决于转子(zhuànzǐ)的转速和颗粒的旋转半径:αc=ω2r式中ω:转子(zhuànzǐ)的角速度(rad/s);r:旋转半径,即颗粒到旋转轴中心的距离(cm)。若转速以惯用的每分钟转数(r/min)来表示,则ω=2πn/60代入上式,得到:αc=ω2r=4π2n2r/3600式中n:转子每分钟转数(r/min)。在说明离心条件(tiáojiàn)时,低速离心通常以转子每分钟的转数表示,如4000r/min。而在高速离心时,特别是在超速离心时,往往用相对离心力来表示。如:65000g。相对离心力是指颗粒所受的离心力与地心引力(重力(zhònglì))之比。即:RCF=Fc/Fg==4π2n2r/(3600×980.6)×g将有关数字代入上式,化简为:RCF=1.12×10-5·n2·r×g式中RCF:相对离心力(g);n:转子每分钟转数(r/min);r:旋转半径(cm);g:重力(zhònglì)加速度,980.6cm/s2转速与RFC的换算:便于(biànyú)进行转速和相对离心力之间的换算,人们在式③的基础上制作了三者关系的列线计算图2、转子离心管及选择⑴离心管玻璃离心管质虽硬、但脆,不能承受超离心的压力。超离心机离心管:塑料管及不锈钢管。注意离心管的平衡离心时样品一般应装满离心管,否则将可能(kěnéng)因有气泡而使管的外部受压不均,造成离心管破裂,使转子不平衡产生事故⑵离心管帽超离心机所用离心管一般都附有管帽,离心时离心管需戴上管帽。3、转子及选择角转子(Type)、水平转子(sw)、垂直转子(v)、区带转子(c)等⑴角转子指离心管腔与转轴成一定倾角的转子角度越大,沉降(chénjiàng)越结实,分离效果越好角度越小,颗粒沉降(chénjiàng)距离短,沉降(chénjiàng)速度快,但分离效果差。颗粒在角转子中沉降时,先沿离心力方向撞向离心管,然后再沿管壁(ɡuǎnbì)滑向管底因此管的一侧会出现颗粒沉积,称为“壁效应”。最适合差速离心,强度大、方便但加速或减速时,对样品有搅动。⑵水平转子旋转时随着转子的转动从垂直(chuízhí)悬吊上升到水平位置(约200—800rpm)时。颗粒在水平转子中的沉降是沿管子方向的,梯度离心中颗粒沉降区带横过离心管,离心后区带不必重新定位但只有处于样品区带中心的颗粒才直接向管底沉降,其它颗粒则撞向壁的两侧,产生“壁效应(xiàoyìng)”,但受振动和变速搅乱后对流现象小得多。Eppendorf管放置、重量(zhòngliàng)的