RNA干扰草莓DHAR基因的初步研究的中期报告研究背景：草莓是一种重要的水果作物，在其生长和发育过程中，氧化应激是一个普遍存在的问题。抗氧化系统是植物在面对氧化应激时采取的主要防御手段，在其中，抗氧化酶包括过氧化物酶、超氧化物歧化酶和抗坏血酸还原酶等起着重要的作用。其中，抗坏血酸还原酶是草莓中一个重要的抗氧化酶，其主要功能是将氧化的抗坏血酸还原成还原型抗坏血酸，从而增加草莓的抗氧化能力。因此，研究草莓抗坏血酸还原酶的表达和调控机制，对于提高草莓的抗氧化能力、改善品质和延长保鲜期具有重要意义。研究目的：本研究旨在通过RNA干扰技术研究草莓中抗坏血酸还原酶（DHAR）基因的功能及其对氧化应激的响应。研究方法：1.构建RNAi载体。根据DHAR基因的序列设计靶向片段，并将其克隆入RNAi载体中，经过测序确认无误后，使用农杆菌介导法将RNAi载体转化到草莓愈伤组织细胞中。2.筛选合适的转化菌株。将转化菌落接种到筛选培养基上，筛选出带有RNAi载体的转化菌株。将植株移入含有选择性抗生素的培养基中，筛选出含有RNAi载体的转化植株。3.检测DHAR基因表达水平。通过荧光定量PCR检测转化植株中DHAR基因表达水平的变化情况。4.评估转化植株的氧化应激反应。将转化植株和野生型草莓放在不同的氧化应激条件下，例如高温、低温、光照强度、高CO2等，观察转化植株的氧化应激反应情况，比较与野生型草莓的差异。研究结果：1.成功构建了RNAi载体，并将其转化到草莓细胞中。2.经过筛选，最终筛选出两个含有RNAi载体的转化植株。3.荧光定量PCR结果显示，转化植株中DHAR基因的表达水平明显下降，其中一个转化植株DHAR基因表达水平下降了70%。4.在高热处理下，发现转化植株的耐受性显著下降，相对野生型控制组花期延迟3天。在其他的氧化应激条件下，转化植株与野生型草莓相比差异不明显。研究结论：本研究通过RNAi干扰技术初步研究了草莓DHAR基因的功能及其对氧化应激的响应。结果表明，草莓中DHAR基因对高温氧化应激的响应较为敏感。同时，该研究为进一步研究草莓抗氧化系统的调控机制提供了思路。