SooPAT一种利用细胞工厂生产鸡马立克氏病疫苗的方法申请号：201010562267.1申请日：2010-11-23申请(专利权)人北京市兽医生物药品厂地址102209北京市大兴区生物医药产业基地永兴路35号发明(设计)人马力王文泉张连祥朱秀芝陈玲周海琴金剑李静袁芳郎立群张洪郑杰贾桂珍李然曹宁车竞常如军张发明张红邢雪莲主分类号A61K39/255(2006.01)I分类号A61K39/255(2006.01)IC12N7/00(2006.01)IA61P31/22(2006.01)I公开(公告)号102000328A公开(公告)日2011-04-06专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王加岭张庆敏www.soopat.com注：本页蓝色字体部分可点击查询相关专利(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102000328A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102000328A(43)申请公布日2011.04.06(21)申请号201010562267.1(22)申请日2010.11.23(71)申请人北京市兽医生物药品厂地址102209北京市大兴区生物医药产业基地永兴路35号(72)发明人马力王文泉张连祥朱秀芝陈玲周海琴金剑李静袁芳郎立群张洪郑杰贾桂珍李然曹宁车竞常如军张发明张红邢雪莲(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王加岭张庆敏(51)Int.Cl.A61K39/255(2006.01)C12N7/00(2006.01)A61P31/22(2006.01)权利要求书2页说明书6页(54)发明名称一种利用细胞工厂生产鸡马立克氏病疫苗的方法(57)摘要本发明属于生物制药技术领域，公开了一种利用细胞工厂制备鸡马立克氏病液氮疫苗814株的方法及其利用这种方法制备的鸡马立克氏病液氮疫苗(814株)。本发明通过细胞工厂生产的鸡马立克氏病液氮疫苗(814株)的质量优良，免疫效力高，免疫效果稳定；除此之外，其还有代次低、蚀斑小、PFU含量高，免疫原性好、成本低、在较短的时间内产生免疫保护等优点。ACN10238CCNN110200032802000338A权利要求书1/2页1.一种鸡马立克氏病疫苗，其特征在于，包括如下组分：每支2mL成品含以下组分及含量：199综合营养液：1.4～1.7mL犊牛血清：0.2～0.4mL冷冻保护液：0.1～0.2mL病毒含量：所含病毒蚀斑数不低于6×106PFU的马立克氏病814株病毒。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为液氮苗。3.一种制备权利要求1或2所述疫苗的方法，包括如下步骤：1)制备鸡胚成纤维细胞悬浮液：将无特定病原体鸡胚用胰酶消化后制成鸡胚成纤维细胞悬浮液；2)接种及更换维持液：往步骤1)制备的鸡胚成纤维细胞悬浮液中加入工作毒种，分装在细胞工厂中，每层150～250mL，于38℃静置培养24～36h后弃去细胞生长液，加入含有2～5％犊牛血清的199营养液，每层150～250mL，于38℃静置培养；或者将步骤1)制备的鸡胚成纤维细胞悬浮液分装在细胞工厂中，每层150～250mL，盖好进液口盖，于38℃静置培养24～36h后弃去细胞生长液，加入含有工作毒种的199营养液，于38℃静置培养；3)收获：培养至80％以上的细胞出现致细胞病变效应时，即可收获，弃去营养液，加入EDTA-胰酶混合消化液250～350mL/层，使消化液与细胞充分接触后，弃去胰酶液，加入199营养液300～400mL/层，停止消化，收集，无菌检验后，分至离心瓶中；4)离心、提取细胞：于2～8℃、1500r/min离心10～20分钟，离心后弃去上清，收集沉淀细胞；5)配苗与分装：收集沉淀细胞，调节pH值7.0～7.4，加入配苗体积70～85％的199综合营养液、配苗体积10～20％的犊牛血清，和配苗体积的5～10％的冷冻保护剂，摇匀，取样做收获前无菌检验，进行活细胞计数后，定量分装到无菌安瓶中封口；6)程序降温：利用程序降温仪进行程序降温，待苗温降至零下80℃～零下120℃时将疫苗放入液氮中保存；7)清洗细胞工厂：用消毒纯化水反复清洗用过的细胞工厂3～4次，包装好，进行钴源照射消毒后重复使用。4.根据权利要求3所述的生产方法，其特征在于，所述工作毒种为血清I型的禽马立克氏病病毒814株。5.根据权利要求3所述的生产方法，其特征在于，所述冷冻保护剂为二甲基亚砜。6.根据权利要求3所述的生产方法，其特征在于，所述步骤2)中工作毒种的接种量为