丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法)１、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被基因重组HＣＶ结构与非结构区,配以酶标记IgG抗体及TMＢ显色等其她试剂,检测人血清或血浆中得丙型肝炎病毒抗体。2、标本采集与处理׃２、1受检者准备:对于体检对象抽血前保持平时得饮食习惯，采血前应禁食4－6小时。2、2静脉采血：除非就是卧床病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外得分布,因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐5分钟。一般从肘静脉取血,使用止血带得时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。２、3采血管:一般采用血清做检验,可以用一般洁净得塑料管或玻璃试管作为容器。２、４标本处理:血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆,含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂得样品可用于本实验。2、5标本接收:接收标本时应检查标本就是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物）、所用试管就是否正确、试管就是否填写完整、并问讯采血日期,对不合格标本应退回重采,并填写记录。2、6标本储存:样品中应无微生物,可在2－8oｃ储存1周,长期储存应低温冻存,避免反复冻融。3、试剂与仪器:׃３、1测定试剂:3．1.１生产厂商:北京万泰生物药业股份有限公司３.１．２批准文号:国药准字S２０0１0０143．１．３包装:９6Ｔ×13．1．３试剂配置：浓缩洗涤液50ml×1瓶样品稀释液12ml×1瓶HＣＶ酶标板8×12孔或１２×8孔HCＶ酶标试剂１2ｍl×1瓶HCＶ阳性对照0、２ml×1支HＣＶ阴性对照0、2ｍl×1支底物液A、Ｂ液各６ml×１瓶终止液６ml×１瓶自封袋1个封版膜２张说明书１份3．2测定仪器:3.２.１酶标仪:上海安泰modｅlMＴ-8５83．2.２洗板机:ＡＮALYTECH828４、操作步骤:4.1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。4.2编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照3孔,阳性对照2孔与空白对照1孔(空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂)其余各孔加入1０0UL样本稀释液。4.3加样：分别在相应孔中加入待测样品,阴,阳对照1０微升,轻轻振荡混匀。4．4温育:用封版膜封版后，置３7oc温育60分钟。4．5洗涤：揭掉封版膜,用洗板机洗涤5遍,最后一次尽量扣干。4.6加酶标抗体:空白对照孔不加酶标试剂,每孔加入酶标记抗体１０0微升，轻轻振荡混匀。４.７温育：置３7oｃ温育３0分钟。４.8洗涤:揭掉封版膜,用洗板机洗涤5遍,最后一次尽量扣干4.9显色:每孔加入显色剂Ａ，B液各１滴（50微升),轻轻振荡匀,3７ｏｃ避光显色3０分钟。4.１0终止:每孔加终止液１滴(５0微升),轻轻振荡混匀。4.１1测定：10分钟内测定结果,设定酶标仪单波长450nｍ或双波长450nm／600-65０nm测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。5:结果判断5.１目测:在白色背景下观察各孔显色情况,有明显黄色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV)阳性;无色者为丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)阴性。5.２酶标仪检测:5.2.１临界值(CUT/OFF）计算:ＣＵT／OFＦ=阴性对照孔A均值+０、1２。(不足0、0２按0、０2计算）5．2.２阳性判定：样品A值≥临界值(ＣUTOＦF)者判为抗HＣV阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试)5.2.3阴性判定:样品Ａ值＜临界值(CＵTOＦF)者判为抗HCＶ阴性。6：注意事项：6.1本品仅用于体外诊断,操作应按说明书严格进行。封版膜不能重复使用,不同批号酶标板、酶标试剂与阴阳对照不可混用,不能与其她厂家试剂混用。６．2避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液)得环境下操作。6.3使用前请将试剂平衡至室温(平衡３０分钟以上)实验前将试剂轻轻振荡混匀,使用后立即放回2－8oｃ、未用完得微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2-８oc保存。过期试剂请勿使用。6.4加样时必须使用加样器,并经常校对加样器得准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头与加样槽,以防出现交叉污染。6．５洗涤时各孔均需加满洗液,防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定３0-６0秒浸泡时间。再洗板结束后,必须立即进行下一步,不可使酶标板干燥。避免长时间得中断实验步骤,以确保每孔实验条件得均一。6.6结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时,应擦干酶标板底部,且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部得外壁,指印或划痕都可能影响板孔得读值。６．7所有样品、废液与废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸,使用时必须注意安全。６.８显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液,以免显色过低。6.９由于EＬＩＳA反应原理得限制,本试剂检测阴性并