AXYGEN manual.doc
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Axyprep质粒DNA小量试剂盒试剂盒组成RNaseA:50mg/ml,室温可贮存6个月,长期贮存于-20℃BufferS1:细菌悬浮液。加入RNaseA后,混合均匀,4℃贮存BufferS2:细菌裂解液(含SDS、NaOH),室温密闭贮存BufferS3:中和液,室温密闭贮存BufferW1:洗涤液,室温密闭贮存BufferW2:去盐液,按照说明加入指定体积的无水乙醇,混合均匀,室温密闭贮存Eluent:洗脱液,室温密闭贮存操作步骤取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液(若使用丰富培养基,菌液体积应减半或者更少),12000×g离心1min,弃尽上清。加250ulBufferS1悬浮细菌沉淀,悬浮需均匀,不应留有小的菌块。(确认BufferS1中加入RNaseA)加入250ulBufferS2,温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解,直至形成透亮澄清的溶液,此步骤不超过5min。注:BufferS2使用后应立即盖紧瓶盖,以免空气中的CO2中和BufferS2中的NaOH,降低溶菌效率。避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA污染。加350ulBufferS3,温和并充分的上下翻转混合6-8次,12000×g离心10min。注:避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA污染。取步骤4中的离心上清并转移到制备管(置于2ml离心管中),12000×g离心1min,弃滤液。将制备管置回离心管,加500ulBufferW1,12000×g离心1min,弃滤液。将制备管置回离心管,加700ulBufferW2,12000×g离心1min,弃滤液。同样的方法再用700ulBufferW2洗涤一次,弃滤液。将制备管置回2ml离心管中,12000×g离心1min。将制备管移入新的1.5ml离心管中,在制备管膜中央加60-80ulEluent或者去离子水,室温静置1min,12000×g离心1min。AxyperpDNA凝胶回收试剂盒步骤:在紫外灯下切下含有目的基因的琼脂糖凝胶,用纸巾洗尽凝胶表面液体并切碎。转入1.5ml离心管中并计算凝胶重量,该重量作为一个凝胶体积(如100mg=100ul体积)。加入3个凝胶体积的BufferDE-A,混合均匀后于75℃加热,直至凝胶熔化完全。加0.5个BufferDE-A体积的BufferDE-B,混合均匀;当分离DNA片段小于400bp时,加入1个凝胶体积的异丙醇。吸取步骤3中的混合液,转移到DNA制备管(置于2ml离心管)中,12000×g离心1min,弃滤液。将制备管置回离心管,加500ulBufferW1,12000×g离心30s,弃滤液。将制备管置回离心管,加700ulBufferW2,12000×g离心30s,弃滤液。同样的方法再用700ulBufferW2洗涤一次,12000×g离心1min。将制备管置回2ml离心管中,12000×g离心1min。将制备管移入新的1.5ml离心管中,在DNA制备膜中央加25-30ulEluent或去离子水,室温静置1min,12000×g离心1min洗脱DNA。AxyprepPCR清洁试剂盒操作步骤在PCR产物中加入3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100ul,补足到100ul);混匀后转移到DNA制备管中,将DNA制备管置于2ml离心管中,12000×g离心1min,弃滤液。将制备管置回2ml离心,加700ulBufferW2,12000×g离心1min,弃滤液。注:BufferW2已加入无水乙醇将制备管置回离心管中,加入400ulBufferW2,12000×g离心1min,弃滤液。将制备管置于清洁的1.5ml离心管中,在制备管膜中央加25-30ulEluent或去离子水,室温静置1min。12000×g离心1min,洗脱DNA。