·l58·中国生物制品学杂志2OO3年第16卷第3期C}tinjBid~s2003。Vo1．16．No．3从人血浆组分Ⅲ中制备天然血管生成抑制素邵华赵小琳王玉光李光谱陈子杨郭立君杨明郭凤云(长春生物制品研究所，长春1301362)【摘要】目的从人血浆组份Ⅲ中制备天然血管生成抑制素(angiostafin)。方法采用IneSephar∞e4B亲合层析、ryl$200层析，纯化人纤溶酶原，经弹性蛋白酶水解、Inesephar∞e4B亲合层析制备血管生成抑制素。结果获得相对分子质量43000和35000两种蛋白。经鸡胚实验，显示出明显血管生成抑制活性。结论应用该工艺从血浆中提取血管生成抑制紊是可行的。【关键词】纤溶酶原血管生成抑制素活性PreparationofNaturalAnigostatinfromBloodProdudFractionⅢSHAOHm，ZHAO)(i，WANGYuguangetal(C，神Imtitute~oducu，C~chun130062)【A~trad】O~fiveT0p~parenatural锄0statiIlfrombloodproductfractionm．MethodsPuf．humanpb锄in0genbyLy血eSephaIDse-4Bafmiqdl瑚】a吨IhymdSephacryls200chro~tography，thenp~pareanigosmfionbyis’vi山e~tasemd~sineS印hamse-4B缅Ili锣chw~tography．Resul~Twokdsofpin．in，’vi山tlle~ladvem0lecularwei~mof43000md35000~specfively，wereobtain~mdshowedsignitlcmtacfi~qof锄0stal缸．ConclusionnIeprocedu~isfeasiblet0山ep~parafionofan一舀0snfrompl黜．【Keywords】Plasmino~nAn0statiIlAcfi~q血管生成抑制因子是新一代抗肿瘤药物。血管由本所实验动物室提供。生成抑制素(锄西06tatiI1)是其中研究较为集中的一种4．纤溶酶原的制备因子。锄西0statiIl由纤溶酶原内部4个环状结构域组制备~sineSephar0s一4B亲合层析介质(按说明成⋯，由体内特异蛋白水解酶系水解纤溶蛋白酶原而书进行)，装柱(1．0m×10cm)，0．1ILpH7．4的PB生成。在体外利用弹性蛋白酶水解纤溶蛋白酶原获缓冲液平衡5个柱体积，临用前用含4％PEG4000得天然angi~tatin的报道很多，但均从血浆中直接获的0．1lIlcLpH7．4PB平衡至基线稳定。得J，而血浆来源受限，价格昂贵。我们利用血液制取组份Ⅲ按10％(重量／体积)比例溶于品生产过程中血浆组分Ⅲ制备天然矾西0sta血，既节约0．1ILpH7．4的PB缓冲液，按4％比例加入PEG了成本，又可使血浆资源得到充分利用，具有一定的4000，边加边搅拌，溶解后置4℃过夜，8000d~n离开发价值。心，取上清。取上清15Il】1上准备好的Lvs~arose4B亲材料与方法合层析柱，流速0．5ml／~n，4％PEG4000的1．人血浆组份Ⅲ0．1HLpH7．4PB平衡，0．1m0l，LpH7．4的PB平由本所血液制品室提供。衡至基线稳定。含0．2~l／L6．氨基己酸的0．1nl0l，L2．试剂pH7．4PB洗脱，洗脱速度0．5ml／min，收集洗脱峰。CNBr-~pharose4B、Sepl1acryls20oHR购自Phar．将Lo，s~awse-4B亲合层析柱收集的纤溶酶1nacia公司；弹性蛋白酶购自SIGMA公司；【广lysine购原样品PEG20000浓缩后，上0．1lIl0l，LpH7．4PB平自上海生物工程公司；蛋白质相对分子质量标准品衡好的Sephacryl$200柱(1．6×85cm)，0．1瑚LpH购自上海生物研究所；6．氨基己酸购自上海试剂厂；7．4PB洗脱，收集目标蛋白峰。SDS-PAGE检测。聚乙二醇(PEG)4000、20000购自北京化工厂。5．血管生成抑制素的制备【2】3．鸡胚将纯化获得的纤溶酶原除菌过滤，以0．1mg／~中国生物制品学杂志2003年第l6卷第3期ChinJBiologieals2003，Vo1．16．No．3·159·的终浓度加入弹性蛋白酶，25℃左右酶切24h以上。2．血管生成抑制素的纯化酶切液上0．1mol／LpH7．4PB平衡好的LysineSeph—酶切液经LysineSepharose-4B亲合