铁皮石解的显微鉴定(1))铁皮石解茎的显微鉴定徐络珊等对使用较广的8种药用石解标准样品进行性状云显微鉴定。其中铁皮石解的显微鉴定如下:铁皮石解茎(直径约4.5mm)横切面;类圆形.边缘不规则波状，表皮细胞外壁稍厚，木化;皮下层卜2列纤维壁稍厚，非木化或微木化;基水薄壁组织细胞大小相差不大.围织维昔束的一圈薄壁细胞较小;外侧纤维群帽状，由1}-4(一5)列纤维组成，纤维类多角形，直径至21“m.壁脚一6林rrm;硅质块直径5一11醉m:木质部导廿大小近似，直径至24pm;内侧纤维群】一2(一3)列纤维，纤维立径至30卿.壁J亨3一5阴;草酸钙针晶多见于近表及的薄壁细她中，针品直径1.6一3”m,(2〕铁皮石解叶鞘显微鉴定李满飞等研究发现，叶鞘表皮细胞的形状、大小以及筋含草酸钙结晶的形状、大小、分布等有较明显的种间区别。同时结合商品药材的比较观察，确证叶鞘的显徽特征较稳定。铁皮石解叶鞘表面特征:上表皮细胞宽20一141林m，长63一144”m;大多含长梭形、长方形、方形或不热J叮形结品，直径9一i3林m，长12一，林m，有的具横向裂隙。下表皮细胞直径礴5一70卜m，角质纹理细波状弯曲，不规则而密;多数细胞含细小梭形结晶，数十至近百个偏向于一端。叶肉中针晶束长72一252卿，束宽36一81醉m;并含细.j,梭形结晶，偏于一端。f3)铁皮石解粉末的显微鉴定刘学平等对商品石解中较多见的10种石解粉末进行了研究。铁皮石解(茎〕粉末的主要鉴别特征:①柬鞘纤维呈长梭形，直径17~26”m，有的边缘呈齿状突起.纹孔甚少，孔沟稀琉。②茎表皮细胞表面观长条形，长多角形或类多角形，直径17，38”in，垂周壁连珠状‘纹孔稀少或不明显。草酸钙针晶多见，束长约至一z卜m。马国祥等采用最刁亚离法，选取35个具有显微鉴别特征的变最.对市场上常见的22种石解(包括铁皮石创〕的显微构造进行系统聚类分析。分析结果与药材性状汲显微鉴定结果基本一致。2.铁皮石解的DNA分子鉴别随着PCR技术的不断发展，DNA分子标记技术逐渐被应用于中药材的鉴定研究。石解种类累多，尤共当加工成枫斗后，传统的鉴定方法难于准确的鉴别，分子标记鉴定技术为石用的鉴别开辟、一条新的途径。张铭等用随机多态性(RAPD)技术对石解顾内26个种和金石解反的E个种进行了签因组DN八多态性分析，并构建聚类树状图‘在对石烈佩%个扬的。、I-田橄，，八记，.…~‘-出铁皮石解特异性条带，进行测序.在符合PCR引物设计的原则下，将原RAPD引物向3喘延长至20bp,当有样品需要鉴定时，提取样品DNA后.再用探针对它进行~次PCR反应，经电泳检测便可达到准确鉴别样品真伪，所以，用此特异性引物进行鉴别时不需再用铁皮石解作对照实验，只要电泳图潜上出现条带即为真品:由于鉴别PCR所用的是高特异性PCR引物，扩增反应的复性温度高、特异性强，一般的DNA污染不会影响鉴定结果，对实验操作的要求也不如RAPD苛刻，所以这种鉴别技术较易掌握，具有很大的实用价值。丁小佘等报道了枫斗类石解rDNAITS的全序列数据库及其分析鉴别。对权斗类石俐的ON人仃5区序列进行测序及分析，建立了21种枫斗类石解的YDNAITS全序列数据岸，枫斗类石解在该区的种间差异显著而稳定，转换和顺换总数为1卜122，变异位点数为341，信息位点数为195。与外类群植物云南石仙挑间的差异较大，转换和颠换总数为13卜161,板斗类石解居群间的差异较小.转换和颇换总数为D，6,运用枫斗类石科rDNAITS区数据库对待检种进行DNA鉴别的全过程可分为3个步骤;①首先将待检种的rDNAITS区全序列测出。此过程包括待检种的总DNA提取、ITS区的全序列扩增、PCR产物的纯化、1'15区的侧序等过程。②利用CLUSTAL、MEGA等软件将待检种的序列与数据库巾各枫斗类石解的rDNAITS区全序列进行分析比较。③序列间无差异的种或差异性最小的种即为该种枫斗类石刑的具体种。待检种将与所属种一起被聚类于同一分支上.且置信度为IOQ%,运用此方法，作者已成功鉴别了隶属于枫斗类石解的待检品I.2、3和，〔来自浙刀冻消的枫斗加工地)，它们分别是齿瓣石剧(待检种I)、兜唇石解(待检种2)、铁皮石解〔待检种3)和杯鞘石解(待检种4)，这些种在无花无叶状态下是难以鉴别其种类的。各待检种的了I)NAITS区个序列经CLUSTAL和MEGA软件运算，在所构建的N)树上与各自所属的石解种聚类为同一支.与数据库中对应的石料种在rDNA几习区的序列上无差异，且置信度应lE,innm