第七章亲和色谱概述常见亲合作用体系1、离子强度：一般来说，提高离子强度，亲和作用减弱或完成破坏。2、PH：在适当的PH下，亲和结合作用较高，在其它PH下，亲和作用减弱或完成破坏。3、抑制氢键形成的物质：脲和盐酸胍的存在可减弱亲和作用4、温度：提高温度，静电作用、氢键、配位键减弱；但是，疏水性相互作用增强5、液体离子：SCN-、I-、CIO4-的存在，疏水性相互作用减弱6、螯合剂：影响配位键，使亲和作用消失78配基亲和配基的分类亲和配基的选择亲和洗脱亲和色谱亲和层析的基本特点基质的选择理想的基质应符合下面的要求：1．极低的非特异性吸附。2．高度的亲水性。3．较好的理化稳定性。4．大量的化学基团能被有效地活化，而且容易和配体结合。5．适当的多孔性。一般亲和吸附剂采用的基质有纤维素、聚丙烯酰胺凝胶、交联葡聚糖、琼脂糖、交联琼脂糖、多孔玻璃珠等。配基的选择222324亲和吸附介质的配基活化基质的活化是指通过对基质进行一定的化学处理，使基质表面上的一些化学基团转变为易于和特定配体结合的活性基团。溴化氰活化法溴化氰活化法是最常用的活化方法之一，活化过程主要是生成亚胺碳酸活性基团，它可以和伯氨(NH2)反应，主要生成异脲衍生物。反应如下：活化耦联过程亲和配基耦联密度测定间臂分子常见的亲和色谱核苷酸及辅酶亲和色谱介质制备吸附和解吸固定化金属离子亲和色谱48亲和作用机理吸附解吸固定化亲和离子色谱的应用54染料亲和色谱介质的制备吸附与解吸免疫亲和色谱免疫亲和色谱过程解吸应用基团专一性大分子亲和色谱1）分离纯化大分子物质如：纯化糖蛋白用凝集素（能可逆性地结合碳水化合物的蛋白质），Lectin-Sepharose4B2)研究酶的结构与功能：分离有生物活性与失去生物活性的蛋白质。t-PA的纯化—酶的抑制剂为亲和配基干扰素的纯化—免疫亲和色谱脱氢酶的纯化—色素亲和色谱淀粉酶抑制剂的纯化—固定化金属离子亲和色谱基因重组融合蛋白的纯化74亲和洗脱基质的选择理想的基质应符合下面的要求：1．极低的非特异性吸附。2．高度的亲水性。3．较好的理化稳定性。4．大量的化学基团能被有效地活化，而且容易和配体结合。5．适当的多孔性。一般亲和吸附剂采用的基质有纤维素、聚丙烯酰胺凝胶、交联葡聚糖、琼脂糖、交联琼脂糖、多孔玻璃珠等。亲和吸附介质的配基染料亲和色谱介质的制备