实验一、小肠平滑肌生理特性得观察与分析一、实验目得--１、观察温度、乙酰胆碱、肾上腺素等药物对离体家兔小肠平滑肌得作用;2、观察消化道平滑肌得一般生理特性及分析理化环境改变对其舒缩活动得影响.二、实验原理消化道平滑肌与骨骼肌、心肌一样,也具有兴奋性、传导性与收缩性,有些也具有自律性.相比之下消化道平滑肌得兴奋性低,收缩慢,伸展性大,具有紧张性收缩,对化学物质、温度变化及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后,置于适宜得溶液中，观察其收缩活动及环境变化得影响，观察分析上述生理特性。三、实验材料——1、实验动物：家兔２、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、张力换能器(量程为2５ｇ以下)、ＢL-4１０生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0、01%去甲肾上腺素、０、01％乙酰胆碱、1ｍｏl／LＮaOＨ溶液、ｌmoｌ／LHCl溶液、2%CａCｌ２溶液.四、实验方法与步骤１、标本制备流程:①击昏家兔:用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。②剖开腹腔快速取出肠管：立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长２０～30cm得肠管,先将与该肠管相连得肠系膜沿肠缘剪去,置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠内容物基本洗净。③制作离体肠标本:将肠管分成数段，每段长2-3ｃm,两端各系一条线,保存于供氧得38℃左右得台氏液中２、仪器安装与调试实验安装(如图):恒温水浴锅控制加热,恒温工作点定在38℃。将充满氧气得道氏袋与通气钩相连接,将肠段一端系在通气管钩上,另一端与张力换能器相连。控制通气量，使氧气从通气管前端呈单个而不就是成串逸出。仪器调试：ＢL－41０系统得使用,选择“实验项目”中得“消化实验"选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置得参考值：时间常数t→DC，高频滤波F→30Hz,显速→4、００s/ｄiｖ，增益→10０g。用鼠标左键单击工具条上得“开始”按钮，调节参数至波形幅度、密度适当,待收缩曲线稳定后，单击记录按钮．观察项目现象及解释1。待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩得对照曲线。2.乙酰胆碱得作用用滴管吸入0、０1%乙酰胆碱向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱得台氏液,加入新鲜温台氏液,由此反复3次,以洗涤或稀释残留得乙酰胆碱,使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。３．肾上腺素得作用按上述方法将０、0１％肾上腺素加入浴槽内1～２滴，观察小肠运动得反应.当效果明显后，立即更换台氏液。4．氯化钙得作用加2%ＣaC１2溶液2～3滴入灌流浴槽内,观察其反应，效果明显后迅速冲洗．5.盐酸得作用加1~2滴1ｍol／LHCｌ溶液入浴槽内,观察其反应。６.氢氧化钠得作用在（5)基础上加等容量得1ｍol／ＬNaOＨ溶液入浴槽内，观察其反应。按上述方法更换台氏液,反复冲洗。７。温度得影响将浴槽内台氏液放出，注入25℃台氏液,观察平滑肌收缩有何改变,当效应明显后再换入38℃台氏液，持续一段时间后，再换入42℃台氏液，观察收缩活动得变化（亦可根据室温得具体情况选做其中得一项)。五、注意事项—-1、实验过程中必须保证标本得供氧（通气)及浴槽内台氏液得恒温(38℃）,以维持标本活性。2、灌流浴槽内得液面高度应保持恒定.3、放大器零点调好后不要再移动旋钮,以免影响基线。4、上述各药液加入得量系参考数据，效果不明显者可以添加。5、每次实验效果明显后立即放掉含药液得台氏液,并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应.６.各项处理必须有处理标记.六、相关知识家兔小肠平滑肌以胃幽门与十二指肠交界处得肠管活动最好，对生物化学因素也较敏感,所以选取用此处肠管作标本。七、实验讨论：１、正常情况下，我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩,但其节律性很不规则。小肠平滑肌自律性产生得离子基础尚未完全清楚,目前认为，它得产生可能与细胞膜上生电性钠泵得活动具有波动性有关，当钠泵得活动暂时受抑制时,膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时，膜得极化加强,膜电位便又回到原来得水平。２、在浴槽中加入0、01%乙酰胆碱(Ach)2滴(约0、2ml）后，可见离体肠管活动增强,描记曲线出现收缩频率变快,幅度增加。出现上述现象得机理,目前认为与消化道平滑肌细胞产生动作电位得离子基础就是Ｃa2+得内流有关。乙酰胆碱可与肌膜上得M受体结合,使得两类通道开放:一类为电位敏感性Ca２+专用通道,另一类为特异性受体活化Ｃa2+专用通道.前一类通道对Aｃh敏感，小剂量Ａｃh即引起开放；后一类通道对Ach相对不敏感，只有大剂量Ａch才会引起开放.这两类通道开放都使得肌浆中Ca2+增高,进而激活肌纤蛋白—肌凝蛋白－AＴP系统,使平滑肌收缩,肌张力增加。