Herceptin对NK细胞体外扩增和杀伤活性的影响及机制研究的开题报告一、研究背景和意义2019年，乳腺癌已成为全球女性最常见的恶性疾病之一，其中HER2阳性乳腺癌占比较大。以往的研究表明人类攻击性NK细胞在对抗HER2阳性乳腺癌中发挥了重要的作用，但HER2阳性乳腺癌细胞的表面HER2受体抑制剂Herceptin对NK细胞的作用并未得到充分探究。因此，本研究旨在深入探究体外条件下Herceptin对NK细胞扩增和杀伤活性的影响及其机制，为乳腺癌治疗提供新的思路和方向。二、研究内容和方法1.实验内容(1)通过分离和纯化NK细胞，建立体外NK细胞培养模型，分别添加不同浓度的Herceptin，探究其对NK细胞的影响。(2)利用MTT法、流式细胞术等技术，探究Herceptin对NK细胞扩增和杀伤活性的影响及其机制。具体包括测定细胞增殖曲线、细胞周期分布、细胞凋亡率、IL-2产生水平、NKG2D的表达水平等重要指标。(3)利用Westernblot和Real-timePCR方法，探究Herceptin对NK细胞活性相关分子的表达水平变化及其机制。2.实验方法(1)细胞培养方法：采用Ficoll-Paque浓缩灌洗法分离人PBMCs，随后从PBMCs中分离出NK细胞，定期观察细胞生长状态，对比不同时间点和不同处理组的细胞密度、生长速率等指标。(2)MTT法：利用MTT还原法测定各组细胞增殖能力，并画出细胞增殖曲线。(3)流式细胞术：细胞周期方面采用propidiumiodide染色，细胞凋亡方面采用Annexin-V/PI染色，细胞表面抗原检测采用相应抗体与荧光染料结合技术（FITC、APC、PE等），并利用流式细胞仪检测细胞状态及相关指标。(4)Westernblot和Real-timePCR：通过Westernblot和Real-timePCR对Herceptin干预NK细胞后，活性相关蛋白和基因的表达水平做定量检测和分析。三、预期结果预计通过对Herceptin对NK细胞扩增和杀伤活性的影响及其机制的研究，探明Herceptin在体外可促进NK细胞的杀伤活性，从而进一步为乳腺癌治疗提供新的治疗策略和方向。