人类肽链释放因子eRF3与生存素survivin的相互作用研究的任务书任务书一、研究背景与意义人类肽链释放因子eRF3（eukaryoticreleasefactor3）是一种蛋白质，作为终止子，参与转录作用中链的终止。而生存素（survivin）是一种蛋白质，广泛存在于各种癌细胞中，参与细胞凋亡和增殖。目前已有研究表明，eRF3和survivin之间存在相互作用关系，但具体机制尚未完全清楚。本研究旨在进一步探讨eRF3和survivin之间的相互作用，揭示其在细胞生长和凋亡过程中的调节作用，为进一步阐明癌症发生机制及提供治疗手段提供理论基础。二、研究内容与方法1.分离纯化eRF3和survivin蛋白质，利用Westernblotting验证其纯度，并利用elisa技术检测其浓度。2.利用双荧光素酶报告基因筛选系统，验证eRF3和survivin之间的蛋白质相互作用。构建多种启动子-响应元件-荧光素酶、参考基因体系，对两种蛋白质进行cotransfection和控制cotransfection，分别检测荧光素酶的表现情况，期望得到双荧光素酶报告基因表现显著促进和抑制作用的标量。3.采用大牛胸腺细胞系Jurkat细胞构建真核细胞中的eRF3和survivin之间的相互作用体系。利用siRNA技术降低eRF3和survivin的表达水平，分别检测细胞增殖、周期和细胞凋亡率的变化情况，期望从中发现eRF3和survivin之间的调节作用。4.通过Westernblotting、Co-IP技术分析eRF3和survivin之间的相互作用可能介导的信号转导通路及其分子机制。三、研究预期成果1.通过Westernblotting和elisa技术成功分离纯化eRF3和survivin蛋白质，并测定其浓度。2.通过双荧光素酶报告基因筛选系统，证实了eRF3和survivin之间的蛋白质相互作用，并确定了其促进和抑制作用的标量。3.构建了真核细胞体系，证实了eRF3和survivin之间的调节作用，揭示了其在细胞增殖、周期和凋亡方面的作用。4.通过Westernblotting和Co-IP技术，揭示了eRF3和survivin之间的相互作用可能介导的信号转导通路及其分子机制。四、研究过程及预算1.蛋白质提取和纯化：20,000元；2.Westernblotting和elisa技术：25,000元；3.双荧光素酶报告基因筛选系统：35,000元；4.真核细胞体系构建：15,000元；5.Westernblotting和Co-IP技术：25,000元。预计总费用：120,000元。五、研究团队研究者：XXX（自然科学博士）指导教师：XXX（教授）地点：XXX大学生命科学学院时间：XXX年X月-XXX年X月六、参考文献1.MansooriB,MohammadiA,ShirjangS,etal.Aberrantexpressionofsurvivinanditssplicevariants:Implicationsfortumorbiologyandcancertherapy[J].CurrentCancerDrugTargets,2017,17(7):652-661.2.TeradaY,TatsukaM,JinnoS,etal.HumancDNAsencodingconservedanduniqueGTP-bindingproteinsoftherabfamily[J].CancerResearch,1991,51(8):2169-2177.3.BeuderU,PlittA,TrümperL,etal.Asplicevariantofthehumaninhibitorofapoptosisprotein2(IAP2)modulatesinductionofapoptosisinhumanBlymphocytes[J].BritishJournalofHaematology,2011,152(3):282-292.