厚荚相思转基因受体系统建立及遗传转化初步研究的任务书任务书任务名称：厚荚相思转基因受体系统建立及遗传转化初步研究任务背景：厚荚相思（Desmodiumgyrans(L.f.)DC.）是一种广泛生长于南亚及东南亚地区的亚热带农作物，其具有药用价值及抗氧化性能，具有很大的发展潜力。目前，该物种的基因转化研究尚处于起步阶段，对厚荚相思遗传转化的有效方法，建立相应变异体的遗传转化体系及评价直至开发，尚需进一步深入的研究。任务目标：本研究旨在建立厚荚相思遗传转化系统，利用基因克隆及酶学技术构建该物种基因库，筛选目标基因，将其构建为转化载体。同时，建立厚荚相思遗传转化体系，对该物种进行遗传转化实验。任务内容：1.厚荚相思基因克隆及酶学分析利用RT-PCR及3'UTR、5'UTR等技术方法，将厚荚相思的基因进行特异性克隆。采用qPCR、Westernblot、酶学等技术分析厚荚相思中目标基因的表达水平及酶活性。2.转化载体构建将厚荚相思基因克隆后，与转化载体进行连接，包括质粒标签、表达载体等，构建目标基因的转化载体。3.建立遗传转化体系利用农杆菌介导体转化法对厚荚相思进行基因遗传转化实验。包括细胞培养、感受态细胞处理、农杆菌转化等步骤，使得目标基因能够被转移至厚荚相思的基因组中。4.转化株筛选及基因表达分析从转化株中，筛选出目标基因表达的正向株系，并进行基因功能表达分析。同时，结合SOM、PCA等多元分析方法，观察转化株差异性。任务时间：本任务计划执行时间为24个月。第1-12个月，针对厚荚相思基因克隆及转化载体构建进行研究；第13-24个月，重点研究厚荚相思遗传转化体系的建立及转化株的筛选及基因表达分析。任务预算：本研究任务预算为100万元人民币，其中各项费用详见下表：|费用项|预算（万元）||---------------|-----------||耗材费|30||设备费|40||人员费|20||其他费用（包括差旅费、会议费等）|10|任务成果：1.厚荚相思基因克隆及转化载体构建方法的建立2.建立厚荚相思遗传转化体系的技术路线3.获得厚荚相思转化株并对其基因表达进行分析4.相关研究成果发表于SCI论文，推广应用任务执行单位：本任务由中国农业科学院农业生物技术研究所承担。