丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定的中期报告.docx
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丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定的中期报告本实验组计划制备丙氨酸氨基转移酶(AST)单克隆抗体,并对其进行鉴定。制备方法:1.制备AST抗原:将已纯化的AST重组蛋白与免疫佐剂混合后,注射于雄性BALB/c小鼠腹腔内,每周注射1次,共注射4周。2.细胞融合:采用SP2/0myeloma细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞,筛选出单克隆细胞株。3.单克隆抗体纯化:采用蛋白A色谱纯化方法纯化单克隆抗体。预期鉴定结果:1.Westernblot:用本实验室已有的AST多克隆抗体和新制备的单克隆抗体进行Westernblot,比较其特异性和灵敏度。2.ELISA:采用已知浓度的AST标准物质制作标准曲线,用新制备的单克隆抗体进行ELISA测定AST浓度,并与多克隆抗体进行比较。中期进展:1.已完成AST抗原注射,获得了一批抗AST血清。2.已完成细胞融合,正在进行单克隆细胞株的筛选和培养。3.正在进行单克隆抗体的纯化和鉴定工作。预计下一阶段可以得到更详细的结果。
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