4例非综合征性唇腭裂患者microRNA的表达分析的开题报告一、研究背景唇腭裂（cleftlipandpalate，CL/P）是一种常见的口颌面畸形，其发病率在不同人群中有所不同。综合征性唇腭裂（syndromiccleftlipandpalate，S-CL/P）占10%左右，而非综合征性唇腭裂（non-syndromiccleftlipandpalate，NS-CL/P）则占90%左右，是一种多基因遗传疾病。在唇腭裂的发生和发展中，microRNA(miRNA)被认为是一个重要的调控因子。miRNA是一种长度约22个核苷酸的小RNA，可以靶向调控多个基因表达，从而发挥广泛的生物学作用。近年来，越来越多的研究表明，miRNA在CL/P的发生和发展中具有重要的作用。二、研究目的本研究旨在分析4例NS-CL/P患者和4例正常对照对象miRNA的表达情况，筛选出与NS-CL/P相关的miRNA，并初步探讨其功能。三、研究内容和方法研究内容：1.收集4例NS-CL/P患者和4例正常对照对象的血液样本，提取总RNA。2.通过高通量测序技术分析miRNA的表达情况，并对测序结果进行分析。3.运用生物信息学方法对筛选出的差异表达miRNA进行功能注释和通路分析。4.对筛选出的miRNA进行定量PCR验证。研究方法：1.患者招募：从相应医院中选择4例NS-CL/P患者和4例正常对照对象进行研究。2.分离RNA：采用Trizol方法提取血液样本中的总RNA。3.构建文库：通过TruSeqSmallRNASamplePrepKit（Illumina）对提取的总RNA进行文库构建。4.高通量测序：使用IlluminaHiSeq2500平台进行高通量测序。5.分析差异表达miRNA：使用EdgeR进行miRNA差异表达分析。6.功能注释和通路分析：使用DIANA-miRPathv3.0对筛选出的差异表达miRNA进行通路分析和功能注释。7.定量PCR验证：使用SYBRGreenqPCRMasterMix(ThermoFisherScientific)对筛选出的miRNA进行定量PCR验证。四、研究意义本研究为进一步研究NS-CL/P的遗传机制提供了重要的理论依据和实验数据。同时，筛选出的差异表达miRNA可供临床诊断和治疗提供新的靶点和方法。