沉默Gli1基因对人肺腺癌细胞株A549DDP顺铂耐药性的影响的任务书一、研究背景及意义肺腺癌是一种常见的恶性肿瘤，顺铂是肺腺癌化疗的重要药物之一。然而，随着治疗时间的延长，肺腺癌细胞对顺铂逐渐出现耐药现象，而导致治疗效果下降，严重影响患者的生存质量与寿命。Gli1基因是Sonic印迹家族成员Gli基因最重要的成员之一，它的异常表达已被发现在多种肿瘤细胞中，并且呈现出癌症初始转移与耐药的趋势。然而，关于Gli1基因对肺腺癌顺铂耐药性的影响，尚无系统性的研究。通过研究Gli1基因的表达与肺腺癌细胞株A549DDP顺铂耐药性的关系，可以为治疗顺铂耐药的肺腺癌患者提供重要的理论参考与临床指导。二、研究目的通过实验手段，探究Gli1基因对肺腺癌细胞株A549DDP顺铂耐药性的影响，明确Gli1基因参与顺铂耐药的机制，为肺腺癌治疗提供新的治疗靶点。三、研究内容1、肺腺癌细胞株的构建及鉴定：采用人肺腺癌细胞株A549为基础，通过体外连续培养、逐级提高顺铂浓度的方法筛选出A549DDP顺铂耐药性细胞株。2、Gli1基因的干扰：通过转染siRNA干扰技术和CRISPR-Cas9系统技术分别干扰Gli1基因的表达，验证Gli1基因在A549DDP细胞株中的耐药性作用。3、顺铂药敏试验：对干扰Gli1基因的A549DDP细胞株和未干扰的A549DDP细胞株进行顺铂药敏试验，观察Gli1基因的干扰对细胞药物敏感性的影响。4、顺铂耐药机制探究：通过Westernblotting和PCR等技术手段检测顺铂耐药相关基因的表达水平，寻找Gli1基因在顺铂耐药中参与的分子机制。四、研究预期成果1、成功构建A549DDP细胞株，并验证其耐药性。2、通过干扰Gli1基因的表达，观察Gli1基因对顺铂耐药的影响。3、通过顺铂药敏试验，查明Gli1基因的耐药机制。4、揭示Gli1基因参与顺铂耐药性的分子机制。五、研究计划本研究计划为期一年，具体实验流程如下：第一季度：1、建立A549和A549DDP细胞株。2、构建Gli1基因的干扰模型。第二季度：1、检测细胞株的表达Gli1基因和耐药性水平。2、进行顺铂药敏试验。第三季度：1、采用Westernblotting和PCR等技术检测顺铂耐药相关基因的表达水平。2、评估Gli1基因在顺铂耐药中的分子机制。第四季度：1、撰写实验报告，提出研究结论。2、准备论文，发表SCI论文1篇。六、研究成果的应用前景和推广价值1、对于肺腺癌重度耐药机制的深入了解。2、为肺腺癌顺铂耐药治疗提供新的治疗靶点。3、为开发新的药物提供理论支持。4、该研究结果具有推广应用价值，对于癌症治疗研究具有积极意义。