基因工程实验题目：基因工程实验学院：化学化工学院专业：生物工程班级：1001学号：201006030103学生姓名：胡洋导师姓名：徐粤宇老师完成日期：2013年6月15日实验一：Tac载体的培养及功能分析一：实验器具恒温箱，分光光度计，恒温摇床，三角瓶5个，报纸，橡皮筋，烧杯2个，玻璃棒1根，超净工作台，培养皿2个，离心管，移液枪1个，接种环1个，酒精灯1个，天平二：实验药品Tac载体，大肠杆菌，卡那霉素，NaoH,Hcl,Nacl三：实验步骤LB固体培养基的配制称取药品药品名称理论称取量(g)实际称取量(g)液体中含量(%)蛋白胨0.50.50301酵母提取物0.250.25700.5Nacl0.50.50401琼脂0.750.75101.5水50mlLB液体培养基的配制称取药品药品名称理论称取量（g）实际称取量（g）液体中含量（%）蛋白胨0.160.52851酵母提取物0.0830.08420.5Nacl0.160.51841水50ml2）将上述培养基分别用NaoH调pH到7.0，分别用两个及三个三角瓶分装，用报纸包好三角瓶并连同培养皿进行高温高压灭菌（121℃，10min）3）待培养基的温度在50℃左右，在液体培养基的三角瓶及一个固体培养基的三角瓶中分别加入卡那霉素终浓度为25ng/ul4)取出灭菌的培养皿等，在事先紫外线灭菌好的超净内的酒精灯旁边倒两个固体培养基的平板5）待培养基凝固后，将每个培养基平均分成四份，并分别贴标签：Tac10ul,Tac20ul,大肠杆菌，LB培养基，并在中间表明学好及姓名的汉语拼音缩写6）在超净工作台内酒精灯旁用接种环按照所贴的标签进行对应的接种工作7）将接种好的培养基倒置30min后放入37℃恒温培养箱内培养10min8)将三个液体培养基分别接种Tac载体10ul后放入37℃恒温培养箱内进行培养并分别在0小时，1小时，2小时，3小时，4小时，5小时，7小时，9小时，11小时，13小时取适量菌液进行OD值得测定，并记录实验结果9）将培养皿取出进行拍照四：实验结果图片左上角是TAC10ul的生长情况，右上角是普通大肠杆菌的，右下角是空白对照，在这里能看到除了空白对照部分其他的都有菌落出现，但是右上角和左下角的部分菌落不是很明白，可能由于滴加菌液的时候没有涂均匀。照片左上角部分为加入普通大肠杆菌的部分，左下角为空白对照，右上角是TAC10ul的部分。可以看出，除了空白区域和普通大肠杆菌部分，其他部分都有菌落出现，但是TAC20ul部分出现的相对少些，可能是因为涂布菌液时涂布棒没有冷却下来以至于菌种被烫死。2）生长曲线：时间1组2组3组平均值8:000.0370.0430.0530.0449:000.0410.0390.0600.04710:000.0820.1040.0840.09011:000.2470.2790.2260.25113:000.1260.7560.44115:001.7761.8081.6361.74016:001.9161.9571.8321.90217:001.9221.9721.7731.88919:002.1572.1391.9912.09621:002.7462.3671.1872.100由生长曲线可以看出在0~4h之间，菌体生长比较缓慢在4~7h之间生长最为迅速明显，应该已经进入对数生长期，在8~12h之后则是呈现稳定缓慢的生长状态，12h后菌种生长几乎趋于平稳状态。