细胞的低温(dīwēn)保存一般在原代或传代2－10次内即大量冻存，作为原种（stockcells），取一支细胞进行传代繁殖，用毕再冻存，这样可保证长期(chángqī)使用和延缓衰老。非玻璃化冷冻(lěngdòng)如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水(tuōshuǐ)，细胞内不致产生大的冰晶，从而减少细胞内冰晶对细胞的损伤；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。在细胞冻存时加入冷冻保护剂，可以保护细胞免受冷冻损伤。原理：1.常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，降低细胞的冰点2.提高胞膜对水的通透性，促进细胞内水渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的损伤；解冻时，促进细胞外水进入细胞内，缓解渗透性肿胀。3.稀释细胞内外未结冰(jiébīnɡ)溶液中的电解质，减少溶质损伤。在培养液中添加(tiānjiā)的保护剂：冻存和复苏(fùsū)的原则：慢冻快融冻存培养(péiyǎng)细胞(4)冻结好的安瓿放入低温冰柜或液氮罐中。温度达-150~-190℃，细胞几乎处在停止状态。冷冻(lěngdòng)时带手套操作，以免冻伤。慢冻程序(chéngxù)缓慢冷冻(lěngdòng)的简化程序解冻(jiědòng)程序玻璃化冷冻(lěngdòng)解决办法：通过添加高浓度的冷冻保护剂，可以显著降低(jiàngdī)形成玻璃化所要求的降温速度。一般冷冻保护剂的浓度为40%-60%。冷冻保护剂：DMSO、乙酰胺、丙二醇、聚乙二醇等。玻璃化冷冻(lěngdòng)的程序解冻(jiědòng)程序步骤(bùzhòu)感谢您的观看(guānkàn)！