第一节细胞培养所用玻璃及塑料(sùliào)制品的清洗与消毒一、清洗(qīngxǐ)1、玻璃器皿的清洗(qīngxǐ)浸泡：初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水(qīnɡshuǐ)浸泡，以使附着物软化或被溶掉。新的初次使用的玻璃器皿先用自来水简单刷洗，然后用5％稀盐酸液浸泡(jìnpào)过夜，以中和其中的碱性物质再次使用的玻璃器皿：用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡(qìpào)或浮在液面上。原因：常附有大量刚使用过的蛋白质，干固后不易洗掉。刷洗：用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质(zázhì)。刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度浸酸：玻璃器皿浸泡到清洁液中的过程注意：浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时间：一般为过夜，不应少于6小时配制、浸泡时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护(bǎohù)好面部及身体裸露部分。冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分(chōngfèn)冲洗。使之尽量不留污染或清洁液的残迹。浸泡后的冲洗过程：2、胶塞的清洗(qīngxǐ)3、塑料制品的清洗(qīngxǐ)二、包装：目的：以便消毒及储存，防止落人灰尘及消毒后再次(zàicì)被污染。包装纸（盒）表面用油性记号笔标明物品名称、消毒日期等！！各种(ɡèzhǒnɡ)用品的包装三、消毒、灭菌防止培养物污染可通过消毒灭菌（将已存在的微生物去除）灭菌sterilization：应用理化方法杀死所有病原(bìngyuán)微生物、非病原(bìngyuán)微生物和芽胞。消毒disinfection：应用理化方法杀死微生物，只要求达到无传染性的目的，不要求全部杀死。无菌germfree：没有活菌。防腐antisepsis：应用(yìngyòng)理化方法防止和抑制微生物生长繁殖。抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌生长繁殖。常用的抑菌剂为抗生素1、消毒灭菌(mièjūn)的方法2、消毒(xiāodú)灭菌的注意事项★湿热消毒(xiāodú)：一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒(xiāodú)。注意：1、不能装太满，保持消毒(xiāodú)器内气体流通。2、在加热升压之前，打开排气阀门，使加热后消毒(xiāodú)器内的残留冷空气排出！！关闭排气阀门，开始升压，待达到所需要的压力时，开始记录时间，并控制压力恒定。3、一般物品：布类、金属器械、玻璃器皿等消毒的要求(yāoqiú)是15磅20min；常规使用液体：消毒15磅15min。4、橡胶和塑料用品：如滤器、EP管、离心管等高压10磅15min。★紫外线消毒：主要用于实验室房间里的空气、操作台表面及桌椅等消毒。时间为30分钟－2小时(xiǎoshí)左右。★过滤除菌消毒：适用于组织细胞培养使用的液体如血清、合成培养液、酶及含有蛋白质具有生物活性的液体等。3、常用设施(shèshī)的消毒及灭菌第二节培养(péiyǎng)操作基本要领和要求2、操作野消毒：现多用紫外线灯灭菌，效果很好。用30瓦紫外线管灯，操作箱消毒20一30分钟即可；操作室空间大，需消毒30～50分钟。在用紫外线灯照射期间，在操作台面上勿置培养细胞和培养用液等物，以免受射线影响(必要时可用纸张覆盖)。紫外线只有直接杀菌作用，工作野用品(yòngpǐn)过多或重叠放置，物品相互遮挡射线，会降低消毒效果3、洗手和着装：原则上和外科手术相同。在利用无菌箱工作时，因整个前臂要伸入箱内，洗刷时一定要清洗到肘部。75％酒精，进行擦洗消毒；必要时亦可用0.2％的新洁尔灭洗涤(xǐdí)消毒。进行培养工作时，如利用净化台，仅戴口罩和工作帽，着一般工作服即可。在无菌室内工作需着消毒衣帽。二、火焰消毒：在无菌环境进行培养或做其它无菌操作时，首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后操作，如安装吸管帽、启开或封闭瓶口等，都需经过火焰烧灼进行。已吸取过营养液的吸管不能再用火焰烧灼！因吸管头中残留营养液能烧焦(shāojiāo)形成炭膜，再用时会把有害物带入培养液中。消毒火焰要求无色或微蓝色，而红黄色或发黑的火苗，表示燃烧不完全或含有杂质，有害物能混入培养液内。因此酒精灯需用96％的不含杂质的酒精，绝不能使用含有二甲苯和甲醇的酒精。三、培养操作注意事项1、进行培养操作时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。2、不能用手触及(chùjí)已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒触及(chùjí)部，如不便消毒时，应取备品更换。3、布局：原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央(图4-1)。工作由始至终要保持一定顺序性。/4、组织或细胞在末做处理(chǔlǐ)之前，勿过早暴露在