钾离子对骨骼肌生理特性的影响一研究内容：不同浓度的钾离子对骨骼肌的收缩是否有影响，如有影响，有何影响。二研究方法：（一）材料：动物健康的成年雄性蟾蜍35只以上注：1.健康可以从动物的活动情况和外观加以判断，若有萎靡不振，行动缓慢等的动物，会对实验结果产生影响，不可作为实验材料。2.选蟾蜍的原因是两栖类变温动物，皮肤光滑湿润，体积小便于操作，低等动物，耐受性强。（二）试剂1.任氏液2.不同浓度梯度的KCL溶液（0.25mmol/ml0.5mmol/ml1mmol/ml2mmol/ml4mmol/ml）注：设置不同浓度的原因：作为一个设计实验，实验过程中影响实验结果的因素很多，所以不能直观的说明实验结果是钾离子所产生的影响。因此，设置不同的剂量组，可以排除这样的干扰，说明骨骼肌的收缩效应是因钾离子试剂浓度的变化而变化的。（三）器材BL-420生物机能实验系统肌动器张力换能器蛙板纱布小烧杯棉线培养皿滴管蛙类手术常用器械铜锌弓（四）操作方法1.破坏脑和脊髓去蟾蜍一只，用自来水冲洗干净，左手握蟾蜍，小指和环指夹住后肢，拇指按压后背，中指放在胸腹部，用食指下压头部前端，使头前仰，右手持金属探针由两眼中间沿脊柱方向下触划，当触到凹陷处即枕骨大孔处，可将探针由此处垂直刺入皮肤，入枕骨大孔后将针折向前方插入颅腔并左右搅动捣毁脑组织，而后退针至脊椎管捣毁脊髓，当四肢松软，呼吸消失表示脑脊髓完全破坏，否则按上述方法重复实验。2.剪除躯干上部及内脏在骶髂关节水平以上1cm处粗剪刀剪断脊柱，左手执镊子夹紧脊柱断端并稍向上提起，使蟾蜍的头与内脏自然下垂，右手执大剪刀，沿两侧将蟾蜍的头与前肢和内脏全部剪除并弃置污物桶内，仅保留后肢，腰背部脊柱及由他发出的神经丛。3.剥皮左手用大镊子夹住脊柱断端，不要夹住或触及神经，右手捏住其上的皮肤边缘，向下剥掉全部后肢的皮肤，将标本放在盛有任氏液的培养皿中。将手及用过的剪子、镊子、蛙板等全部手术器械用自来水洗净，在进行以下操作。4.分离两腿用镊子从背位夹住脊柱将标本提起，用粗剪刀剪去向上突出的骶骨，然后沿正中线将脊柱分为两半并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离，将两腿浸入盛有任氏液的烧杯中。5.完成腓肠肌标本在膝关节处将大腿肌肉全部剪出，并将股骨刮干净，然后再距膝关节上1cm处剪断股骨，在跟腱处穿入细线并结扎，剪断结扎线，以下靠近脚部的跟腱，左手提起结扎线，右手用玻璃分针分离腓肠肌至膝关节处，再在膝关节处将小腿其余部分剪除。即标本完成。6检查标本兴奋性将浸有任氏液的锌铜弓放在腓肠肌上，若明显收缩，则表明标本兴奋性良好，可放入任氏液中备用。连接标本及实验装置1从上往下依次把张力换能器和肌动器和刺激电极固定在支架上，把跟腱和结扎线记在张力换能器上应变片的小孔上，使肌肉处于自然拉伸的状态下，然后把股骨端固定于肌动器的螺丝孔内，并旋紧。2.将张力换能器的输出端插入BL-420生物机能实验系统的前面板的信号输入接口，刺激输出导线一端与计算机前面板刺激输出接口相连，另一端与肌动器刺激电极的接线柱相连。3.打开BL-420生物机能实验系统，步骤依次为：输入信号-选择通道-张力。（注：过程中要不断的滴加任氏液，使标本保持活性。）实验分组及给药方法本实验共设5组KCL浓度梯度组，浓度分别为0.25mmol/ml0.5mmol/ml1mmol/ml2mmol/ml4mmol/ml。第五组为实验对照组。每组两只蟾蜍，依据实验内容分别滴加不同浓度的KCL溶液及任氏液，并用铜锌弓给予刺激，分别观察并记录时间数据。实验组1蛙/组123450.25mmol/ml溶液11110任氏液00001实验组2蛙/组123450.5mmol/ml溶液11110任氏液00001实验组3蛙/组123451mmol/ml溶液11110任氏液00001实验组4蛙/组123452mmol/ml溶液11110任氏液00001实验组5蛙/组123454mmol/ml溶液11110任氏液00001观察实验结果并记录。刺激参数设置可参考如下：方式：连续单刺激，延时：0.05毫秒，波宽：0.5-1.0毫秒，频率：1HZ・5--10HZ・20--60HZ依次增加，强度：最适强度。三预期结果通过实验，可能出现的实验结果有：随着钾离子浓度的升高，骨骼肌的收缩性也随之增强。随着钾离子浓度的升高，骨骼肌的收缩性随之减弱。随着钾离子浓度的升高，骨骼肌的收缩性没有明显的变化。