一、动物细胞工程基础技术手段应用动物细胞培养技术动物细胞培养、细胞核移植、细胞融合、单克隆抗体的制备等①深入探索并改造生物的遗传特性；②大量培养细胞二、动物细胞培养1．概念从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2．过程(1)分散组织细胞：剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间。(2)原代培养：具有贴壁生长和接触抑制的特点。(3)传代培养①先用胰蛋白酶等处理贴满瓶壁的细胞，再分瓶继续培养。②10代以内的细胞保持正常的二倍体核型。③细胞传到10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，此时部分细胞的细胞核型可能会发生改变。当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。3．培养条件(1)无菌、无毒的环境：培养液中添加一定量的抗生素，并定期更换培养液，以清除代谢产物，防止对细胞自身造成危害。(2)营养eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等,②通常还加入血清、血浆等天然成分))(3)温度和pHeq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(温度：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜,pH：多数适宜pH为7.2～7.4))(4)气体环境eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(O2：细胞代谢所必需,CO2：维持培养液的pH))4．应用(1)生产生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。(2)应用于基因工程。(3)检测有毒物质，判断物质的毒性。(4)用于生理、病理、药理等方面的研究。三、动物体细胞核移植技术和克隆动物1．理论基础动物细胞核的全能性。2．概念将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植两类。3．过程4．应用前景(1)加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。(2)增加濒危物种的存活数量。(3)转基因动物可作为生物反应器生产医用蛋白。(4)用于组织器官的移植。(5)研究胚胎发育及衰老过程。(6)追踪研究疾病的发展和治疗疾病。5．存在问题(1)成功率低。(2)绝大多数克隆动物还存在健康问题。(3)克隆动物食品的安全性问题存在争议。一、动物组织培养仔细阅读教材P44～46，观察分析图2－16，探讨下列问题：1．为什么选择动物胚胎或幼龄动物的器官或组织进行动物细胞培养？提示：幼龄动物的组织细胞分化程度低、分裂能力强，比老年动物的组织细胞易于培养。2．进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要成分是什么？用胃蛋白酶行吗？提示：蛋白质。不行，因为培养动物细胞的pH不适合胃蛋白酶发挥作用。3．动物胚胎或幼龄动物的器官剪碎后用胰蛋白酶处理的目的是什么？不定期用胰蛋白酶把培养细胞从瓶壁上脱离的目的是什么？提示：动物胚胎或幼龄动物的器官剪碎后用胰蛋白酶分解组织细胞间质中的胶原蛋白，从而使组织分散成单个细胞。在进行培养时使细胞与培养液充分接触。细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞的生长和繁殖，培养瓶中的细胞越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时就停止增殖，这种现象叫做接触抑制。需要定期用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，进行传代培养。4．多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中。你认为体外培养细胞时需要提供哪些物质和什么样的环境条件？提示：充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境以及无菌、无毒的环境。5．培养动物细胞的培养基是液体培养基还是固体培养基？培养基中为什么要加入动物血清？提示：液体培养基。为了保证细胞培养时营养物质和生长因子的供给，培养基中需添加一定量的动物血清等天然成分，可以补充合成培养基中缺乏的物质。6．动物细胞的培养过程是怎样的？提示：二、动物体细胞核移植技术和克隆动物阅读教材P47～49，观察分析图2－21、2－22，探讨下列问题：1．为什么动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植？提示：因为胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。2．动物体细胞核移植时选用卵母细胞作受体细胞的原因是什么？提示：因为卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。3．试分析克隆动物遗传性状与其体内遗传物质构成具有怎样的关系？提示：动物体细胞核移植产生的新个体的亲本有三个：体细胞核供体、卵母细胞细胞质供体、代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样，因此新个体性状与体细胞核供体基本相同。卵母细胞的细