二穗短柄草Ds转座群体的构建与利用的中期报告一、概述二穗短柄草是一种常见的禾草科植物，也是模式植物中的一种。其GenBank序列已经发布，但利用遗传工程进行基因功能鉴定尚需构建转座子T-DNA库，以实现大规模随机插入突变体的快速制备和筛选。本实验旨在构建二穗短柄草转座子Ds（Dissociation）T-DNA库，以及构建和优化Ds转座群体，为进一步揭示二穗短柄草基因功能奠定基础。二、材料与方法1.构建Ds-Tpase载体pUTT-Ds根据Ds-Tpase序列设计引物，PCR扩增该序列并克隆至pUTT载体中，构建Ds-Tpase载体pUTT-Ds。2.制备和筛选转化植株将pUTT-Ds重组质粒转化AgrobacteriumEHA105，并通过农杆菌介导转化二穗短柄草，借助PCR扩增对转化植株进行筛选。3.构建Ds转座群体通过遗传分析鉴定含Ds转座子的粒子系，自交稳定后，筛选并鉴定转座群体。三、结果与分析1.构建Ds-Tpase载体pUTT-DsDs-Tpase载体pUTT-Ds经NheI和XhoI酶切验证后，符合预期。2.制备和筛选转化植株将pUTT-Ds质粒转化AgrobacteriumEHA105，在二穗短柄草愈伤组织中获得转化植株。通过PCR扩增和测序验证，确认有10株植株包含Ds转座子插入。3.构建Ds转座群体将含Ds转座子的粒子系通过自交稳定，筛选出具有Ds转座子插入的转座群体。经验证，转座群体的转座率为50%。四、结论本实验成功构建了二穗短柄草Ds转座子T-DNA库和Ds转座群体，并验证了转座群体的转座率。下一步将通过更深入的分析，揭示二穗短柄草基因功能的奥秘。