能源植物甜高粱初代培养研究.doc
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能源植物甜高粱初代培养研究摘要:【目的】探讨不同激素配比对甜高粱愈伤组织诱导的影响,同时获得无菌试管苗或植株,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以甜高粱的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度的NAA和2,4-D的配比组合,对愈伤组织和试管苗进行诱导。【结果】适宜甜高粱愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+0.05mg/LNAA+2.0mg/L2,4-D,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳,出愈率最高可达30.00%。出苗率最高的培养基组合为MS+2,4-D2.0mg/L+NAA0.15mg/L,出苗率最高为83.33%。关键词:甜高粱、激素配比、愈伤组织、诱导、试管苗EarlyfosteringofenergyplantsweetsorghumAbstract:【Objective】Discussessweetsorghumcallusinductioneffectbydifferenthormoneratio,andgetsteriletubeseedlingsorplant,forwhichestablisheffectivesweetsorghumgenetictransformationsystemlaythefoundation.【Methods】Usethematuresweetsorghumseedsforexplants,addingdifferentconcentrationsNAAand2,4-dratioofcombinationinMSculture,whichwouldgetcallusinductionandtubeseedlings.【Results】AppropriatesweetsorghumcallusinductionofthebestmediumforMS+0.05mg/LNAAand2.0mg/L2,4-d,whichcangetgoodqualitycallus,thecalluspieceoflargeandbrightcolor,andthecallusinductionratecanbeashighas30.00%.ThehighestgerminationrateofculturemediumcombinationforMS+2,4-d2.0mg/L+NAA0.15mg/L,emergenceratecanbeashighas83.33%.Keywords:Sweetsorghum,Hormoneratio,Callus,Induction,Tubeseedlings甜高粱又叫糖高粱,糖高粱(学名Sorghumbicolor(L.)Moench,英文sugarsorghum)是粒用高粱的一个变种,它同普通高粱一样,每亩地能结出150-500kg的粮食,但它的精华主要在富含糖分的茎秆,其单产可达5,000—10,000kg每亩[1]。甜高粱茎秆可用于制糖、酿酒、制酒精燃料、造纸和饲料等。是一种糖料作物,也是优良的饲料作物和能源作物[2]。作为最具优势的可再生能源物质,大力发展甜高粱并用于生产乙醇是解决国家能源枯竭的有效途径之一。与其他谷类农作物相比,甜高粱不仅具有较高的综合利用价值,还具有种植区域广、抗逆性强等特点,在一些土壤贫瘠地区,种植甜高粱也可以获得较高的经济利益。我国现有甜高粱品种不少,但可利用价值不高[3]。植物组织培养技术是选育、改良作物品种的重要手段之一,建立高效稳定的甜高粱再生繁殖体系和遗传转化体系是实现甜高粱基因转化、品种改良的首要条件[4]。本试验就是以甜高粱的成熟种子为外植体,采用不同激素浓度配比,对甜高粱的愈伤组织进行诱导,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。1材料与方法1.1试验材料供试材料为成熟的甜高粱种子。甜高粱种子由冯晓东老师提供。1.2试验方法1.2.1种子萌发特性的研究试验1.2.1.1种子吸水率的测定将风干种子每组60粒,置于25℃恒温箱中吸胀,并定时测定种子重量,直至种子重量基本稳定为止,3次重复,最后计算种子吸水率,种子吸水率的计算公式为[5]:种子吸水率=(种子增加的重量/风干种子重)×100%1.2.1.2种子发芽试验试验于2012年5月进行,取100粒甜高粱种子,分别放入直径9cm的垫有滤纸的培养皿中,培养液为蒸馏水。于光照培养箱中培养,培养箱调节为白天(光照时段)16h、温度25℃,光照为12000lx;夜间(黑暗时段)温度为16℃。每天定时统计已萌发的种子数,同时对培养皿定量加水,以保证种子周围有足够的湿度。重复以上试验过程,直到最后连续5d没有种子继续萌发时停止试验[6]。观察开始萌发时间,测定其发芽率、发芽势,计算公式[7]为:发芽率(GR)=每