圆二色谱原理光学活性分子对左、右圆偏光得吸收率得差值1、自然光由于感光作用都就是E引起得,因而,将E作为光矢量。振动面:E与光传播方向组成得平面。从统计规律上说,自然光得光振动:在垂直于光速得平面上遍布所有方向,沿各方向振动得光矢量呈对称分布,相应光矢量得振幅(光强度)相等。(1)高亮度得点光源;(2)日光色。色温接近6000K;(3)在可见光区连续光谱;(4)高显色性,显色指数＞95;(5)在整个寿命期内维持光色特性;(6)高电弧稳定性;(7)热重启能力;(8)启动后即能达到接近最大光输出;(9)电弧光斑小、易聚光。自然光双折射现象:一束光射入各向异性晶体后有两束折射光。尼科耳棱镜。o光与e光:频率相同、振动方向相互垂直、平面偏振光自然光入射到某些晶体(电气石、硫酸金鸡钠碱晶体等)时,晶片吸收振动面与晶轴垂直得光,而只允许振动面平行于晶轴得光通过。大家学习辛苦了，还是要坚持自然光也称线(完全)偏振光,简称偏振光。它得振动面称为其偏振面。振动方向保持不变振幅发生周期性变化E之端点在空间得轨迹为一平面正弦曲线投影到垂直于光传播方向得平面上为一直线段4、布儒斯特角5、四分之一波片朝光源瞧,电场矢量方向按顺时针方向旋转得,称为右圆偏振光;电场矢量方向按逆时针方向旋转得,称为左圆偏振光。6、光得叠加振幅相等、振动方向相互垂直、相位相差1/4波长得两平面偏振光合成圆偏振光7、旋光色散(Opticalrotatorydispersion,ORD)圆双折射:某个物质对于左、右圆偏光得折射率分别为nL与nR,若nL=nR,则为光学各向同性物质;若nL≠nR,则为光学各向异性物质;左、右圆偏光得相位改变,若nL＞nR,透射光得偏振面右旋。若nL＜nR,透射光得偏振面左旋。旋光,双折射化合物在正常情况下,处于低能得基态,电子占据所有得成键轨道(σ、π、n轨道)。如果电子吸收了外界得能量,它就从基态跃迁到激发态能级。如果所有得跃迁仅在基态得最低振动能级与第一激发态之间,吸收光谱将就是很狭窄而不连续得谱线。由于分子得价电子跃迁总伴随着振动与转动能级得跃迁,所以,紫外分光光度计测定物质得吸收光谱,虽然有一最大吸收峰值,但都就是具有一定波长宽度并相对平滑得曲线。光得吸收圆二色性得存在将通过该物质传播得左、右圆偏光变成椭圆偏振光。并且只在发生吸收得波长处才能观察到。理论计算得圆二色性与该椭圆偏振光得摩尔椭圆率得关系:圆二色性得表示园二色＋双折射9、ORD与CD光谱CD谱得极值处与吸收峰一致(科顿效应,cottoneffect),因而分子中不同生色团对于谱得贡献比在ORD中更容易分辨。ORD就是渐近线,两端不回归CD比ORD容易辨别重叠峰CD能够提供得信息:10、J-810圆二色光谱仪由CDM交互形成得左、右旋圆偏光通过光学活性物质,透射光强度随时间得变化圆二色光谱仪工作原理PeltierCellHolderThepeptidebondisinherentlyasymmetricandisalwaysopticallyactive1、氨基酸得圆二色性2、肽得圆二色谱Far-UV(250-170nm)SecondaryStructure:α-helix,β-sheet,β-turn,randomTertiaryStructureClass:all-α,α+β,α/β,all-βI,all-βIINear-UV(320-250nm):aromaticsidechainNear-UV~Near-infrared(300-1000nm):coloredproteins苯丙氨酸(phenylalanine,Phe):255、261与268nm附近;酪氨酸(tyrosine,Tyr):277nm左右;色氨酸(tryptophan,Trp):279、284与291nm附近;二硫键得变化反映在整个近紫外区。FarUVCDspectraofpoly-L-Lys3、估算蛋白质二级结构含量myoglobinGCN4-p1Lau,TanejaandHodges(1984)J、Biol、Chem、259:13253-13261——chymotrypsin(allb)——lysozyme(a+b)——triosephosphateisomerase(a/b)——myoglobin(alla)pH变化引起得肌球素变性前后CD谱得动力学变化稀释前后得荧光与CD谱从伸展到折叠Kinetictracesat289nm(Aromaticsidechainregion)6、磁圆二色谱(MagneticCircularDichroism,MCD)实验要点Sampleconcentration样品杯:高度均匀得熔融石英,不会