Nanog基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备的中期报告本项目旨在探究Nanog基因在原核表达中的功能及蛋白质结构特征，为其后续在细胞和动物实验中的应用打下基础。以下是本项目的中期报告：一、实验进展：1.原核表达：首先，我们利用PCR扩增得到了Nanog基因的编码序列，并使用基因克隆技术将其克隆到表达载体pET28a中。之后，我们利用大肠杆菌BL21(DE3)表达感受态菌株进行原核表达。2.蛋白纯化：通过紫外可见光谱测定，我们发现Nanog蛋白在感受态菌株中成功表达，但是出现了大量的包涵体。因此，我们采用了Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白，并将其加入到含有0.02MTris-HCl，0.15MNaCl，pH7.5的缓冲液中进行纯化。3.抗体制备：我们随机选择了3只小鼠，将纯化后的Nanog蛋白注射到小鼠体内以制备抗体。目前，已经取得了小鼠血清并对其进行了初步的酶联免疫吸附实验（ELISA）检测。二、存在的问题：1.过量的包涵体：我们发现大量的包涵体会干扰Nanog蛋白的表达和纯化，导致获得的蛋白质并不纯净。因此，我们需要对表达和纯化条件进行优化，以减少包涵体的产生。2.抗体的特异性：目前，我们还没有对制备的抗体进行进一步的验证。为了确保抗体的特异性和有效性，我们需要进行Westernblotting和免疫组化等实验，以检测抗体与其特定抗原结合的能力。三、下一步计划：1.优化表达和纯化条件以获得更高纯度的Nanog蛋白。2.进行Westernblotting和免疫组化实验，以验证制备的抗体的特异性和有效性。3.利用X射线晶体学等方法对Nanog蛋白的结构进行进一步探究，以为后续的细胞和动物实验打下基础。