紫外分光光度法测定水杨酸一、实验目的1、了解紫外可见光度法的应用。2、进一步掌握紫外分光光度计的基本操作和数据处理。二、实验原理分光光度法是根据物质的吸光光谱及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种方法。光照射溶液时，当光子的能量（hn）与被照射物质的基态和激发态能量之差相等时，就能被吸收，不同物质的基态和激发态的能量之差不相等，因此吸收光子的能量也不相同，即吸收光的波长不同，这就是物质对光的选择性吸收。分光光度法测定物质含量的依据是朗伯-比尔定律，A=ebc，C为物质的量浓度，e称为摩尔吸光系数，b为吸收层厚度，吸光度与透光率T的关系是：A=—lgT。定量测定时，常用的定量方法有标准曲线法、标准对照法、吸光系数比较法及差示分光光度法，它们各有其适用的范围，由于许多物质在可见光区无特征吸收，而在近紫外（200nm—400nm）却有特征吸收，故需用紫外光为光源进行测定，紫外光光度法除了定量测定外尚能做定性鉴别，纯物质检查，并可为结构分析提供信息。三、仪器和试剂仪器：TU-1900双光束紫外分光光度计，计算机试剂：水杨酸标准品、5%的甲醇水溶液、水杨酸样品四：实验步骤1、样品溶液的配制：取水杨酸72.0000mg，置于1000ml容量瓶中加5%的甲醇水溶液使之溶解并稀释至刻度，用吸量管精密吸取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ml上述溶液分别置于100ml容量瓶中，各加5%甲酸水溶液稀释至刻度，编号得4个不同浓度水杨酸标准溶液。2、绘制吸收曲线：取上述水杨酸标准溶液，以甲酸水溶液作参比。用TU-1900双光束紫外分光光度计在200-700nm间进行波长扫描，得吸收光谱图，确定最大吸收波长λman。3、绘制标准曲线：以λman为波长，测定标准系列的吸光度A。以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线。4、样品的测定：在与标准曲线同样的测定条件下，测定待测水杨酸样品的浓度。序号浓度（mg/L）波长(nm)Abs12345五、实验结果及图谱1、最大吸收波长的确定：2、标准曲线：3、计算水杨酸样品含量：六、思考题：1、本实验为什么用甲醇溶液作参比溶液？2、简述单波长分光光度计和双波长分光光度计的主要区别?答案:1、参比溶液也叫空白溶液，在光度测量时，利用参比溶液来调节仪器的零点，借以抵消待测成分以外的试剂对光的吸收，保证分析的准确度。2、就仪器的组件而言，两者最大的区别是单色器的个数不同，单波长分光光度计只有一个单色器，而双波长分光光度计则有两个单色器。另外，它们的出口信号不同；单波长分光光度计测的是样品池和参比池吸光度之差，双波长分光光度计测的是样品在两波长处吸光度之差。因此前者用两个比色皿进行测量，后者用一个比色皿进行测量。