HCMVUL82基因重组质粒在HFF中的表达及其Mab的制备的开题报告【摘要】本文目标为了探索在HFF（HumanForeskinFibroblast）中表达HCMV（人类巨细胞病毒）UL82基因的方法，并制备出对该蛋白进行特异性识别的单克隆抗体。针对这一目标，使用PCR技术从HCMVAD169株中扩增出UL82基因并进行了限制性内切酶切割，将UL82基因定向克隆至pET28a拷贝质粒中。随后，通过转染的方法将构建出的重组质粒导入HFF细胞中，通过Westernblot进行表达检测。同时，将表达出的蛋白纯化并用于小鼠进行免疫，并对其免疫抗体进行检测。【关键词】HCMV；UL82基因；表达；Mab制备。一、背景人类巨细胞病毒（HCMV）是一种广泛存在于全球人群中的DNA病毒，它常常长期潜伏于宿主内，具有很强的异质性和适应性。虽然在健康人群中很少出现症状，但HCMV感染却与多种疾病的发生发展密切相关。因此，对HCMV的研究成为当今医学领域的一个热点问题。HCMV基因组约为235kb，包含大约200个基因，从而与多个细胞途径及宿主抗体免疫系统构成复杂的相互作用。其中，UL82基因被认为是HCMV感染周期中的一个关键蛋白，其中的多肽片段还被应用于HCMV感染的诊断和预防中。尽管UL82基因已被广泛研究，但在HFF细胞中表达UL82基因的研究仍然不足，而且对该蛋白的特异性识别抗体也很少报道。二、研究目的本研究旨在探究UL82基因在HFF细胞中的表达方法，并制备针对该蛋白的特异性单克隆抗体，为HCMV的相关研究提供基础支持。三、研究内容1.从HCMVAD169株中扩增UL82基因并进行限制性内切酶切割。2.将UL82基因定向克隆至克隆marker拷贝质粒pET28a中。3.将构建好的重组质粒导入HFF细胞中，通过Westernblot进行表达检测。4.表达出的蛋白纯化，免疫小鼠制备Mab（单克隆抗体）。5.检测Mab的特异性和灵敏度。四、研究意义本研究将揭示HCMV在HFF中的表达机制，为其在宿主细胞中的感染提供理论支持。同时，获得的Mab对HCMV研究有重要的帮助，提高HCMV感染诊断的准确性，且具有较广阔的应用前景。【参考文献】WangD,ZhanD,ChenL,etal.StructuralandfunctionalanalysisofhumancytomegalovirusUL82kinase[J].CellularMicrobiology,2020,e13256.GrenE,KeirB,MaringerK,etal.ACombinedScreeningStrategyIdentifiesBMP2asaNovelHostCellRestrictionFactorforHumanCytomegalovirus[J].JVirology,2020,94(1).GaoY,MaJ,ZhangL,etal.AConservedMotifwithintheHumanCytomegalovirusMajorImmediate-early1(IE1)ProteinIsRequiredforSplicingRegulationoftheIE1andUL123GeneTranscripts[J].Molecular&CellularProteomics,2019,18(9):1865-1876.