生物素-亲和素反应的放大技术第二节亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记一、理化特性二、亲合素（或链酶亲合素）的标记第三节生物素-亲合素系统的特点一、灵敏度二、特异性三、稳定性四、适用性五、其他生物素（biotin）、亲和素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。生物素（维生素H）动、植物组织中广泛分布,卵黄和肝含量高分子量小，244.31D一、活化生物素活化生物素活化生物素如何减小空间位阻标记蛋白质醛基的活化生物素标记蛋白质巯基的活化生物素标记核酸的活化生物素特性：活化生物素通过侧链与蛋白分子连接；一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性（是BAS多级放大作用的物质基础）；BNHS多标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质,BHZ则多标记微酸性抗原；抗原、抗体标记后活性不变；可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记后，活性降低；注意事项：选择活化生物素：依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性；控制生物素：蛋白质比例生物素：IgG用量比(mg/mg)宜为2:1,IgG应用浓度0.5~5μg/ml;生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab；使用交联臂减少空间阻力第二节亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记结构四亚基糖蛋白四肽链蛋白无糖基PI10.56结合位色氨酸色氨酸生物素44Ka10151015活性13～15U15～18U二、亲合素/链霉亲合素的标记第三节生物素-亲合素系统(BAS)的特点第四节生物素-亲合素系统的应用一、生物素-亲合素系统基本类型及原理BA法，也称标记亲合素-生物素法:（labeledavidin-biotin,LAB）Ag+B·AbAg-Ab·BA·E/SA·EAg-Ab·B-A/SA·E特点：以A·E/SA·E代替BAB法中的A/SA，省却了加B·E的步骤3.BAB此外，按待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗体，BAS分为直接法和间接法。二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用思考题小结在生物素—亲合素（链霉亲合素）放大系统应用中，无论采用酶、荧光素或发光物作为检测示踪剂，均是待测抗原与生物素化抗体反应形成复合物后，再利用生物素与亲合素间的多价放大结合特性，或直接与标有示踪剂的生物素结合（BA、LAB法），或依次与亲合素（链霉亲合素）、生物素示踪标记物反应连接成聚合物（BAB、ABC法），最终使待测反应信号被放大，提高检测方法的灵敏度。