沙门氏菌得检验1.目得规范沙门氏菌检测方法,使产品检验有据可依。2.消毒灭菌要求微生物检测用得玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染与接种得培养物等,必须经灭菌后方能使用、注:本实验采用湿热灭菌法,吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求得温度与压力灭菌,一般就是１2１℃(１。5MＰa)下灭菌2０min。３.原理沙门氏菌得检验分四个连续阶段:４.操作步骤4。1准备工作配制实验所需得缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基(无需灭菌)、HＥ培养基、三糖铁培养基等,并将准备好得均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。4、2前增菌在无菌环境下,称取25ｇ待检样品放入盛有2２5ml灭菌好得缓冲蛋白胨水中,然后放到36±1℃得恒温培养箱内进行前增菌４—6h;4、3增菌在无菌环境下,用灭菌好得吸管吸取1０mｌ前增菌液接种与100ｍl亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌,恒温培养箱３6±1℃,培养18-2４h;4、4分离培养将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm得接种环挑取一环,划线于表面无凝结水得ＢS与SS琼脂平板各一个,于３6±1℃培养１8－24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属得菌落、如无典型或可疑菌落,应再继续培养2４±２ｈ。然后观察培养得平板(黄色得菌落就是大肠杆菌;蓝绿色或蓝色,产硫化氢,菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌)。沙门氏菌属各亚属在其她选择性琼脂平板得菌落特征4。5生化实验用灭菌好得接种针在培养平板上挑取可疑得沙门氏菌单菌落,接种到三糖铁培养基上,恒温培养箱3６±１℃,培养１８-２4h;典型沙门氏菌培养物斜面显红色(碱性),底端显黄色(酸性),有气体产生,形成硫化氢(琼脂变黑)。三糖铁培养基变化表肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内得反应结果同时将三糖铁培养基上可疑得菌株,做生化实验,将可疑得沙门氏菌落分别接种于尿素、赖氨酸脱羧等发酵管中恒温培养箱36±1℃,培养18－24h(根据上表进行判定),将可疑得沙门氏菌补做进一步得生化试验,如下表:三糖铁琼脂与赖氨酸脱羧酶培养基筛选三糖铁琼脂反应赖氨酸脱羧酶培养基可能得菌属斜面底层产气硫化氢KＡ＋(—)＋(－)＋可疑沙门氏菌属ＫA＋(—)-(－)＋可疑沙门氏菌属ＡA＋(－)+(-)＋可疑亚利桑那菌AA+(－)－(+)－非沙门氏菌属KK+/—+/-+／—非沙门氏菌属备注:K－—产碱;A--产酸;+-—阳性反应,－-阴性反应,(—)少见反应,＋/--阳性或阴性反应三糖铁琼脂与尿素酶琼脂筛选三糖铁琼脂反应尿素酶琼脂可能得菌属斜面底层产气硫化氢KA+(－)+(－)—可疑沙门氏菌属ＡA＋(—)＋(-)－可疑亚利桑那菌ＫＡ+(—)+(-)＋非沙门氏菌属AA+(—)＋(-)+非沙门氏菌属KＫ＋／－＋/-＋/－非沙门氏菌属备注:Ｋ-—产碱;A--产酸;+—-阳性反应,－—阴性反应,(-)少见反应,+/－—阳性或阴性反应沙门氏菌属反应序号生化项目反应沙门氏菌亚利桑那菌１尿素酶试验-—2V-P试验－—3氰化钾试验－－４赖氨酸脱羧酶试验＋+５吲哚试验－－6丙二酸钠试验－+7卫矛醇试验d－备注:＋-－阳性反应,——阴性反应,d—反应不定Ａ、靛基质反应接种后在恒温培养箱3６±1℃,培养1８—2４h,形成红色表明就是阳性反应;B、尿素反应接种后在恒温培养箱36±１℃,培养2-24h,发现颜色变红表明就是阳性反应;沙门氏菌生化实验鉴定结果4.6血清学实验在干净得培养皿上,用灭菌好得接种环沾取两环AFO多价血清,取适量得菌种制成菌悬液,将玻片轻轻摇动30-６0s,观察反应,如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物,则认为菌体与ＡFO多价血清凝结,反之不凝结;不凝结就是认为检验样品中不含沙门氏菌,如果凝结,在洁净得波片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于生理盐水滴内,使成为均一性得混浊悬菌液。将玻片轻轻摇动30～6０ｓ。观察反应,如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物,即认为有自凝性,反之无自凝性。有自凝性得菌株可排除;无自凝性得菌株,做以下实验:1、O抗原检查:用认为无自凝力得纯菌落,用1滴Ｏ型血清(例如O４、Ｏ5、O16、Ｏ12等)代替生理盐水,对该菌株进行排查,如发生凝集,判为阳性,对照国标得附表判定就是什么菌种、2、H抗原检查:如果Ｏ抗原不能确定就是何种菌株,按照表用上述同样得方法测试H抗原,如发生凝集,判为阳性,对照国标得附表判定就是什么菌种。３、Ｖi抗原检查:若以上还不能检定菌种,则取大量菌种与生理盐水制成浓得菌悬液在酒精灯上煮沸,然后按照上述方法做Vi抗原实验,如发生凝集,判为阳性,对照国标得附表判定就是什么菌种、生化试验鉴定结果5.结果报告5。1报告阳性结果:“发现沙门氏菌”或“发现