生物技术综合实验Comprehensiveexperimentsofbiotechnology主要内容Contents：一、课程简介核酸的分离与纯化IsolationandPurificationofNucleicAcid二、电泳技术AgaroseGelElrctrophoresisandSDS-PAGE三、聚合酶链式反应技术PolymeraseChainReaction四、DNA序列测定DNASequencing五、分子杂交技术MolecularHybridization－Southern,NorthernandWesternBlot六、基因文库和cDNA文库的构建ConstructionofcDNALibraryandDNALibrary七、外源基因的克隆与表达HeterogenicGeneCloningandExpression八、蛋白质的分离、纯化技术IsolationandPurificationofProtein1表达蛋白质的分离沉淀蛋白质分离1.1凝胶过滤层析凝胶过滤层析柱胶球大小-介质离子粗细影响流动胶球大小-介质离子粗细影响流动二、离子交换层析两大类离子交换介质四、亲和层析特异性配体亲和层析法与通用性配体亲和层析法金属螯合亲和层析疏水性层析法反相层析法离子交换层析树脂材质离子交换剂的选择緩衝液的選擇離子交換樹脂的前處理可用pH或盐梯度洗脱方式有：连续梯度(continuousgradient)及阶段梯度(stepwisegradient)。离子交换法操作要点离子交换层析的应用凝胶过滤层析凝胶的分类凝胶过滤法的应用亲和层析亲和层析法基质的选择纤维素、聚丙烯酰胺、交联葡聚糖、琼脂糖、交联琼脂糖、多孔性玻璃珠；用在蛋白質，仍以聚糖類為最佳。以Sepharose為例，可自行用CNBr活化，使糖分子接上-O-C≡N(cyanateester)基，再與配体上的胺基反應。有些親和層析法使用spacerarm來降低配体的立体障礙影响亲和层析的因素親和層析法的應用液相柱层析总结离子交换剂的选择可用pH或盐梯度洗脱方式有：连续梯度(continuousgradient)及阶段梯度(stepwisegradient)。离子交换法操作要点凝胶的分类亲和层析