猪病的实验室诊断技术近些年我国养猪业蓬勃发展，整体模式还是以散养户和小规模养殖场结合为主。养殖技术参差不齐，疾病的流行也是呈现多样化的趋势。老的传染病死灰复燃、新的疾病层出不穷、多种疾病混合感染的案例不断出现。过去兽医依靠经验能对疾病做出初步诊断，但现在疾病的临床表现呈现多元化、非典型性病例时有发现，仅凭临床症状和流行病学很难对疾病做出准确的诊断。并且临床诊断具有滞后性，一旦猪场出现疾病大规模流行、到了临床症状非常明显的阶段，再想控制就比较困难了。近些年，国内外越来越重视猪病的实验室诊断技术，不但可以快速、准确的诊断疾病以便合理用药，还可以对于潜伏期的疾病做出预警，评估猪群疫苗接种效果、了解母源抗体水平等，为猪场的安全生产保驾护航。1.实验室检测技术介绍1.1涂片镜检及病原体培养实验通过提取血液、尿液、痰液及组织等，涂抹在玻片上，在显微镜下观察细菌等病原体。通过革兰氏染色还可以区别革兰氏阳性或阴性细菌的感染。涂片镜检实验方法简单、仅需要显微镜就可实验、可用于疾病的初期判断。病原体培养实验是一种体外人工繁殖病原体的技术，选取病料接种在培养基上、37℃生长12~24h、通过菌落形态及生化反应来判断结果。分离培养的菌株还可以进一步做药敏实验，通过抑菌试验筛选出敏感性强、疗效好的抗菌药物进行治疗。仔猪黄白痢等疾病通过细菌培养比较好判断，而副猪嗜血杆菌、传染病胸膜肺炎放线杆菌等较难判断，并且越来越多的猪只混合感染、需要结合其他实验方法进一步诊断。1.2聚合酶链式反应(PCR)通过扩增放大特定的DNA片段来检测微量病原体的技术。伪狂犬、蓝耳病、乙脑、传染性肠胃炎、轮状病毒、猪瘟等都可以应用PCR方法检测。该方法灵敏度高、适用于疾病的早期诊断。但该实验方法操作复杂、技术要求高、需要专门的实验室、不适用于基层开展。1.3酶联免疫吸附实验(ELISA)将抗原或抗体包被在聚乙烯微孔板上、加入待检标本进行抗原抗体反应、洗脱后加入辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记的二抗进行反应、洗脱后加入底物夜进行显色反应、通过颜色变化或者酶标仪来读取结果。ELISA实验是一种比较经典的实验室方法，包括间接法、双抗原夹心法、捕获法等，开用于病原体及血清抗体的测定，即能定性也能得出定量结果，现在市场上有多种商品化的试剂盒供选择。但ELISA实验操作需要有相应的仪器设备如孵育箱、洗板机、酶标仪等，并且ELISA实验操作比较繁琐、实验过程需要1-2个小时、不适用于单个标本的检测。1.4胶体金实验将抗原或抗体结合在胶体金颗粒上边，与待检血清结合、在醋酸纤维膜载体上形成显色反应的一种技术方法，主要有层析法和渗滤法。胶体金检测方法可用血清、全血标本，不需要特殊的仪器设备、可以实现单个标本现场检测，敏感性和特异性也不错，试剂稳定性好、一般可以室温保存。1.5血凝实验某些病毒的血凝素能够选择性的使动物红细胞发生凝集，当特异性的抗体与相应病毒结合使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。该实验方法可用于口蹄疫、流感、细小病毒、副猪嗜血杆菌、乙脑等疾病的诊断。但血凝实验操作复杂、技术要求高，需要一定条件的实验室才能开展。2.实验室检测技术用途2.1疾病诊断通过病原体的检测及血清抗体的检测可以了解猪只的健康情况，结合临床症状明确诊断疾病。对于早期控制、合理用药有着重要作用。2.2免疫效果观察接种前，通过血清抗体测定可以了解猪只抗体保护水平、尤其是仔猪的母源抗体，这样就可以为猪只疫苗接种时间提供参考。接种后，检测血清抗体可了解猪群的疫苗接种效果，为免疫程序的制定和修改提供帮助。3.实验室检测技术注意事项3.1病料的采集不同类型的疾病病料采集和运输的方式也不太一样，怀疑细菌性疾病时要做到无菌采集、采集病料所用的刀、剪、镊子等用具须经严格消毒后方可使用。病毒性疾病要采集病毒集中的部位如淋巴结、脾脏、肾脏等。同时采样人员做好个人防护，必须戴好手套、口罩、帽子，穿好工作服等防护用品后才能进行采样操作，以减少被感染的机会。3.2结果假阳性和假阴性实验室检查结果会出现假阳性和假阴性，即没有感染疾病的猪只得出阳性结果、感染疾病的猪只得出阴性结果。病料污染、实验室交叉污染、检测试剂质量问题等都会造成假阳性结果。假阴性的情况就比较复杂，如疾病的窗口期、检测试剂的灵敏度、送检病料的采样时机和部位等都会对实验结果有影响。总之，在猪病防控过程中，一定要有科学严谨的态度和方法，不能抱有侥幸心理。学习现代的猪病防