猪病的血清学诊断技术.ppt
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血清学试验的类型凝集试验的类型---直接凝集试验和间接凝集试验凝集试验鸡白痢的平板凝集试验-----种鸡场中鸡白痢的净化血清平板凝集试验------牛羊病的初筛试管凝集试验------牛羊病的确诊间接凝集试验:可溶性抗原和抗体进行的凝集试验,需颗粒性载体的参与。原理:猪瘟病毒的抗原结合与红细胞制成正向间接血凝抗原。被检血清中如有猪瘟抗体可与红细胞表面的病毒相结合,出现红细胞凝集。1.加稀释液:第一排的1-9孔、第三排1-3孔、5-6孔,第四排的1-12孔每孔加入稀释液50ul;2.倍比稀释:被检血清稀释:每个检样用一排进行倍比稀释,吸取50ul被检血清加入第一排的第一孔,倍比稀释到第9孔;阴性血清稀释:吸取阴性对照血清50ul第三排孔的第一孔,倍比稀释到第3孔;第5、6孔为稀释液对照,不加血清;阳性血清稀释:吸取阳性对照血清50ul加入第四排的第一孔,倍比稀释到第12孔;2.加猪瘟正向间接血凝抗原,每孔各50ul;以上各孔加入抗原25ul;振荡混匀1min;3.反应:37C孵育2h;4.观察结果:阴性对照的第3孔和稀释液对照孔应为孔底圆点,液体澄清;阳性对照的1-8孔为完全凝集,结果正常可读。被检样品完全凝集的孔数为抗体效价。接种猪瘟疫苗的猪群免疫抗体效价至少应达到1:16,具有保护力。沉淀试验的类型环状沉淀试验琼脂凝胶扩散试验抗体的检测:测抗体时,加待检血清的相邻孔应加入标准阳性血清作为对照,以资比较。测定抗体效价时可倍比稀释血清,以出现沉淀带的血清最大稀释度为抗体效价。由于病毒个体微小,须用电子显微镜观察胶体金标记抗体快速诊断技术(金标抗体技术)酶标抗体技术,如酶联免疫吸附试验(ELISA)荧光抗体技术ELISAELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay)酶联免疫吸附试验移液器酶标板ELISA结果原理:原理:1.稀释被检血清:将被检血清稀释40倍(195ul稀释液+5ul被检血清);2.加样:在酶标板的1、2孔加入阴性血清,3、4孔加入阳性血清,5-8孔依次加入上述稀释好的被检血清;25C孵育30min;(均为100ul)3.洗涤:3-5次,每次每孔加入洗涤液300ul;4.加酶标抗体:每孔100ul;25C孵育30min;;5.重复第3步洗涤;6.加底物溶液:每孔各100ul;25C孵育30min;7.加终止液:每孔各100ul;8.读板:将检测板置于酶标仪进行检测。荧光抗体检测倒置荧光显微镜THANKS