免疫学检测方法检测技术种类细菌凝集反应被广泛应用于细菌学的诊断。在凝集反应中，将参与反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。凝集法测定哈维氏弧菌抗体的效价沉淀凝集反应双向免疫扩散沉淀线示意图琼扩反应中和实验荧光免疫技术1、原理荧光色素1、荧光抗体染色方法直接法间接法2、荧光抗体技术的应用在细菌学诊断中的应用在病毒感染诊断中的应用其它方面的应用间接荧光抗体法（IFAT）操作步骤如下：（1）单层血细胞滴片，室温晾干，放入丙酮中固定10min。室温晾干。（2）以小白鼠抗血清（或杂交瘤细胞上清液）为第一抗体，加在血细胞抗原上。37℃湿盒中孵育45min。（3）0.01MPBS洗三次，每次5min。（4）加第二抗体IgG-FITC，37℃湿盒中孵育45min。（5）0.01MPBS洗三次，每次5min。（6）甘油封片，荧光镜下观察，拍照。间接免疫荧光法检测对虾白斑症病毒病间接免疫荧光法检测淋巴囊肿病毒直接ELISA间接ELISA间接酶联免疫吸附试验操作步骤如下：（1）分别以不同单抗为第一抗体，加在血细胞抗原上。37℃湿盒中孵育60min。（2）0.01MPBS洗三次，每次5min。（3）加AP-IgG为第二抗体，37℃湿盒中孵育45min。（4）0.01MPBS洗三次，每次5min。（5）加NBT/BCIP底物缓冲液发色10min，（6）出现颜色加终止液终止反应。（7）用酶标分析仪在405nm,处测定各孔的吸光度，计算P／N（样品光吸收值与阴性对照的值），判定ELISA反应结果。大于2.1时可判断为阳性。以最大显色至阳性的显色孔50%反应孔的抗体稀释倍数为抗体效价。图DOTBLOT方法筛选结果图。免疫组织化学方法定扇贝血细胞分布细胞免疫化学法检测病毒感染四、WesternblotWestBlot图：淋巴囊肿病毒与抗血清的Westernblotting结果免疫电镜技术图胶体金标记免疫电镜结果[(A)(D)bar=200nm;(B)(C)bar=100nm]胶体金免疫技术斑点免疫金渗滤法（DIGFA）的应用与研究进展是20世纪八十年代发展起来的一种免疫学检测方法，具有简便、快速、准确等优点。目前在医学检验中主要应用于检测HBsAg、HCG和HIV等。斑点免疫金渗滤法原理：NCM为固相载体-----通过渗滤----抗原与抗体在膜上快速反应-----标记的胶体金堆积显色。临床应用：间接法测抗体：NCM抗原----样品抗体----金标抗抗体显色夹心法测抗原：NCM多抗----样品抗原----金标单抗显色。直接法检测抗原NCM病毒---金标单抗显色DIGFA步骤简化、时间缩短。DIGFA检测操作程序2µl检测样品-----NCM----直径2mm点-----晾干；100µl封闭液，渗入；100µl的金标抗体，渗入；100µl的0.01MPBS-T（含0.05%Tween-20），渗入；检测结果：红色斑点的为阳性，无红色斑点的为阴性。阳性代表检测样品中有病毒，阴性则无。DIGFA检测结果,红色斑点的为病毒阳性,无红色斑点的为病毒阴性。TheresultofDIGFA,reddotshowsthereisWSSV,otherwise,thereisnoWSSV.免疫金标层析法的应用与研究进展检测试纸的原理是：采用夹心免疫层析原理，即由金标单抗同检测样品液中的抗原反应，形成由金标单抗-抗原复合物，当该复合物层析至硝酸纤维素膜上预先包被在检测线上的另一种单抗处时，此处的抗体会识别该复合物中抗原，反应的结果便形成了金标单抗+抗原+包被单抗的夹心结构，最终是金标单抗上的胶体金颗粒在此固定并累积出现肉眼可见的红色线，未反应的金标单抗则仍继续层析前行,当到达点预先包被在质控线羊抗鼠抗体处时，金标单抗被其结合住，从而在此处也出现由胶体金颗粒固定并累积而显现出肉眼可见的红色线，结果是：检测线显示红色表示样品阳性；检测线不显示红色，表示样品阴性。质控线显示红色，表示试纸有效；质控线处不显示红色，说明试纸失效，即或是金标单抗、或是羊抗鼠抗体失活，检测结果无效。该试纸条构成:载体板7；在该载体板7的两端部，分别设有加样端4吸水层和手持端1吸水层；在该载体板7中部段设有硝酸纤维膜的检测层2，在该检测层2与加样端4吸水层交界处，设有载有金标单抗E的玻璃纤维层块3，该层块3一端部分设置在加样端4吸水层之下，其另一端部分设置在检测层2之上；在与该层块3延续的检测层2上设有检测线6和质控线5，该检测线6和质控线5处分别包被有抗病毒单抗和羊抗鼠IgG。用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需