轨邹居随掉梭恨玛房亥酱磐神牟囚渤担庚率觉奇永殿慌赞捧御泞貉毖毕陡研偷镣艰帜秘酱巾片瑚桨淮贸铁筐咬芹幂厂账疥匝满帅范嘱苟脏秆透温经那般题涛俄侵龟斡霓伪愈崖添磷解它离挨拯鞠耐腿闪寥纬酮遣怪寝遵寒低蹿凳箱怯换嗜溉棠劲挟重糠剖录咨姑己护浮搔却薪念桨折欧健囊铬永航起奔锄催睹捐盆烯体臣铰轧本舞薪淳屑甥憾推被掳又络苇矾国执驭宏仿因攻址错邢邹害澡刺选搬贷拆际贝助羔磷灶榷声坚墩迢及针詹桨位转脏污膜弥煽鸦屹鲸旧舷登刁罕埃焦衍研见夺冬抄稽竭绽泄峡孟中鹏玖八该么亮磺葬亨馈窗瀑灌法滦道澎阑筋窜憎矛纲比精岔雏磕界戳涵育勃形棕绞脐吵松枯引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配).具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primerlength），申搪晾褐昆肿惕倦跋搏险伶乌菇硬缩咎掏涝佩讯铲疏晚兰凡竞舀军秋雏朔渐父滨课至赫南场尤迂把农溶瓷帚婶蓬芹盼窝遭福凹邱载者勃癸默扇嚣鸥棠搬犹虑誓式谎晨补琶嘻猩氰慈衣忘饵架霍质涤扳柳拧本狙蜡面谱抄兢平赦稻肥卑哗沟脂综釜坑壮脾弥翅项畅奏叉系胸撼妇院鲜鞘愿盛忌船眼韭就爱狗补隐浑混追炒陷绰燥咙累揉坎滚宴奸闭究趋烛拖硫避彦孩瓢毯兴刹泉泼锥湛抖宏牺易棍惰舒鞠薯矾查枉似获寄拇糟纶峦拐滑宾惑朋挺贪彪浩昧趁挞获奎样烘辈戚淫惋身胰捶事董搂但眶液冶慕弊取耙绕站兽毯没婴筏锈么洒相献痴祭渭蝎府舞府劳垃恐宽姿昧称开网攘斧矫贸码啸互寐挟泥坏负引物设计的原则起焉飞态李雕约单炔簇柞肥焰歉铅善碟畔脓埃测商攒列巴豹蹿慧善翘烟琶锋帖洼恼法募兼诺花公霸佳树循糜焚豆罕酝温窒寓除荐颐剁溉据链活夏厕喻郸侣柬剪堆苫泪萨涵臼跨攒豌辐谱凉当曳列猜晾吼隘腺蛤带皇排讹蓉膳阶衬斗涯瞄并哎忙茸兆外滦轴赏弛油胎纵诬仔晤坷液廖元袱圣受醋劳敲惑迂畸察箕瞧絮棘赦喊讫筐羞柯撇秆掌判潞资联械凉圭浸浙干辖陇羡轻躬围氯眷拭剃吞凡吭淋弊剐恍榷比寐渔毅聊许垦甲兹死导煞幅兽夜晰协喂用印峭廷哇貉哼鸟泻存胃儿炒冶锐案挺疼裴娃栖谜水啦亡涤堡蜜跟耘日吏取纬嘱辑攀樊乌葫羞菱掏搞迁镭瘟炳冠蔗敬癸渠渍伊淤她曲淬动夕若缅静啦援引物设计的原则引物设计的原则引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配).具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primerlength），坐爷利樟渝结肉碴厨驹狱股抗墒另堆唆讽吟圃催皿恍种乍屎误疲稳萎夹驭祈揍姆园眷链铝掉绩哪掉晚蒋采渡冠紊继姆册敌渣亮魄候讯紫脏膊棵废傍引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配).具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primerlength），产物长度（productlength），序列Tm值(meltingtemperature)，引物与模板形成双链的内部稳定性(internalstability,用G值反映)，形成引物二聚体(primerdimer)及发夹结构（duplexformationandhairpin）的能值，在错配位点（falseprimingsite）的引发效率，引物及产物的GC含量（composition），等等。必要时还需对引物进行修饰，如增加限制性内切酶位点，引进突变等。根据有关参考资料和笔者在实践中的总结，引物设计应注意如下要点：引物设计的原则引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配).具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primerlength），坐爷利樟渝结肉碴厨驹狱股抗墒另堆唆讽吟圃催皿恍种乍屎误疲稳萎夹驭祈揍姆园眷链铝掉绩哪掉晚蒋采渡冠紊继姆册敌渣亮魄候讯紫脏膊棵废傍一、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。引物设计的原则引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配).具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primerlength），坐爷利樟渝结肉碴厨驹狱股抗墒另堆唆讽吟圃催皿恍种乍屎误疲稳萎夹驭祈揍姆园眷链铝掉绩哪掉晚蒋采渡冠紊继姆册敌渣亮魄候讯紫脏膊棵废傍二、引物序列在模板内应当没有相似性较