一电泳的基本原理二纸电泳2滤纸的选择与处理层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。3点样点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品）干法、湿法4电泳电桥水平、加盖、电压稳定、注意时间5显色及分析蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红BAa：茚三酮、靛红核酸：紫外光下观察一般洗脱定量三薄膜电泳四薄层电泳五凝胶电泳www.niuwk.com牛牛文库文档分享www.niuwk.com牛牛文库文档分享1聚丙烯酰胺凝胶的制备丙稀酰胺（单体）＋N,N-甲叉双丙稀酰胺（交联剂）→（催化剂）→聚合催化剂：（1）过硫酸铵＋四甲基乙二胺（TEMED）（2）核黄素（VitB2）＋光改变单体浓度可改变凝胶孔径交联剂对孔径有影响：5％最小根据要分离物质的相对分子质量选择合适的单体浓度。2不连续电泳中样品压缩成层的原理不连续电泳含两层或三层不同孔径的凝胶，用不同pH值的缓冲液：样品胶：大孔径，pH6.7～6.8Tris-HCl缓冲液浓缩胶：与样品胶相同分离胶：小孔径，pH8.8～8.9Tris-HCl缓冲液样品压缩成层原理：电极缓冲液：pH8.3Tris-甘氨酸HCl→(解离）→Cl－，Cl－泳动速度最快（快离子）CH2(NH2)COOH→(样品胶、浓缩胶pH6.7~6.8）→CH2(NH2)COO－（0.1％～1.0％）泳动速度最慢（慢离子）蛋白质（P）泳动速度介于快慢离子之间电泳时，Cl－超过P走在最前面，其后形成一个离子浓度较低的低电导区→较高电位梯度→P和慢离子加速移动→P压缩成层样品进入分离胶后，pH为9.5（电泳过程实测），CH2(NH2)COO－增加，泳动速度增大，很快超过P，P在均一的电位梯度和pH条件下分离SDS-凝胶电泳原理凝胶电泳的操作要点www.niuwk.com牛牛文库文档分享烟曲霉菌中抗真菌活性肽类物质的分离与纯化六等电点聚焦电泳1稳定的pH梯度的形成2两性电解质载体要求：由多乙烯多胺与丙烯酸加成制备（有不同pH范围的商品两性电解质载体）3支持pH梯度的介质密度梯度溶液（用于自由电泳）凝胶（如聚丙烯酰胺凝胶）4操作要点pH梯度支持介质的制备聚焦电泳检测两性电解质载体的除去电泳技术思考题