电泳技术Electrophoresis本章主要知识点SDS-PAGE电泳的基本原理及过程琼脂糖电泳的特点及其应用等电聚焦电泳的基本原理双相电泳的概念及其特点学习总体要求电泳概念电泳的简单原理Stoke’sLaw（斯托克斯定律）电泳迁移率电泳的大致分类区带电泳的主要技术凝胶电泳丙烯酰胺的聚合影响聚合的主要因素聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分子筛效应分子筛效应琼脂糖凝胶的性能、结构与特点电泳新介质电泳系统的基本组成电泳洗脱仪：回收样品凝胶扫描和摄录装置：对电泳区带进行扫描，从而给出定量的结果。垂直电泳槽及灌胶模具电泳的一般过程常规聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳前的准备工作缓冲系统的选择原则离子强度的选择凝胶浓度的选择凝胶浓度太大，孔径小于样品分子尺寸，电泳时蛋白质分子不能进入凝胶，样品仍留在加样位置；凝胶浓度太小，孔径太大，样品中各种蛋白质分子均随缓冲液推进，不能得到很好的分离；凝胶浓度(C=2.6%)PAGE的具体操作过程SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE的原理蛋白质样品用SDS处理后亚基的解聚和分子形状的改变未知蛋白质分子量的测定载体两性电解质pH梯度等电聚焦工作原理载体两性电解质pH梯度等电聚焦原理等电聚焦分离示意图常规PAGE和等电聚焦电泳的区别载体两性电解质和pH梯度的形成用于等电聚焦的主要载体两性电解质pH梯度的形成其次，一些低pI的载体两性电解质（荷其次多的负电）也向阳极移动，直到它的净电荷减少到0才停止。同样的，其周围环境溶液pH值也等于它本身的pI。依次类推，所有的载体两性电解质分子用增加pI级数的方法将分别在阳极、阴极之间到达它们自己的位置，从而给出一个pH梯度。载体两性电解质在电场中形成pH梯度的模式图水平等电聚焦电泳等电聚焦的主要应用双相电泳本章作业分子筛效应电泳的一般过程凝胶浓度太大，孔径小于样品分子尺寸，电泳时蛋白质分子不能进入凝胶，样品仍留在加样位置；凝胶浓度太小，孔径太大，样品中各种蛋白质分子均随缓冲液推进，不能得到很好的分离；SDS-PAGE的原理蛋白质样品用SDS处理后亚基的解聚和分子形状的改变工作原理载体两性电解质和pH梯度的形成