实验一目的意义:目的意义:新城疫血凝与血凝抑制试验掌握血凝试验()与血凝抑制试验(掌握血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HAI)的基本方法;)的基本方法;体会HA与HAI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用.与在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用.体会在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用基本原理:基本原理:许多病毒表面具血凝素,具有凝集某些动物或人红细胞的特性,许多病毒表面具血凝素,具有凝集某些动物或人红细胞的特性,称为血凝现象,可用于鉴定病毒.血凝现象可以被特异性抗体所抑制,称为血凝现象,可用于鉴定病毒.血凝现象可以被特异性抗体所抑制,称为血凝抑制现象,利用这种特性可进行血清学试验,称为血凝抑制现象,利用这种特性可进行血清学试验,称为血凝抑制试验.试验.器材及试剂:器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液;待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液;待检血清:抗鸡新城疫病病毒阳性血清;待检血清:抗鸡新城疫病病毒阳性血清;生理盐水,1%鸡红细胞96孔形微量血凝板,加样器等.鸡红细胞,生理盐水,1%鸡红细胞,96孔V形微量血凝板,加样器等.实验步骤(一)血凝试验(HA):取96孔板,按以下步血凝试验(HA)96孔板孔板,骤操作:骤操作:1,第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12孔加生理盐水50ul第一排112孔各加生理盐水ul,第二排112孔加生理盐水ul孔各加生理盐水50孔加生理盐水50为红细胞对照;为红细胞对照;2,吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul至第2孔,依次稀释50ul病毒液于第一排第病毒液于第一排第1混匀后取50ul至第至第2至第12孔弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2至第12孔,弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12.3,第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细第一排112孔及第二排12孔各加孔及第二排1孔各加1胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀.50ul,微型震荡器震荡2min混匀混匀.4,室温静置10-30分,观察结果.室温静置10-30分观察结果.5,结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即HI效价,用2n表示.HI效价效价,表示.血凝试验流程图(二)血凝抑制试验(HAI):取一96孔板,按以下步骤操作:孔板,血凝抑制试验(HAI)取一96孔板按以下步骤操作:1,4个单位抗原的制备:按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位个单位抗原的制备:HA试验测出的病毒血凝价除以即为4试验测出的病毒血凝价除以4血凝素的稀释度.血凝素的稀释度.2,待检血清的稀释:第一,二,三排1-12孔各加生理盐水50ul,于第一待检血清的稀释:第一,三排112孔各加生理盐水孔各加生理盐水50ul,排第1孔中加入50ul待检血清反复吹吸3次混匀后,50ul至第待检血清,至第2排第1孔中加入50ul待检血清,反复吹吸3-5次混匀后,取50ul至第2孔混吸取50ul至第至第3……,依次稀释至第12孔弃去50ul,经倍比稀释,匀,吸取50ul至第3孔……,依次稀释至第12孔,弃去50ul,经倍比稀释,血清的稀释倍数为2血清的稀释倍数为21~212.3,第一,二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul,微量震荡器震荡2min混第一,二排112孔各加个单位血凝素50ul,微量震荡器震荡2min混孔各加4匀;4,室温静置20min;室温静置20min;5,第一,二,三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微量震荡器震荡2min第一,三排112孔各加鸡红细胞孔各加1%鸡红细胞50ul,微量震荡器震荡2min混匀混匀.混匀混匀.6,室温静置10-30分,观察结果;室温静置10-30分观察结果;7,结果判定:第二排为抗原对照,红细胞应全部凝集,第结果判定:第二排为抗原对照,红细胞应全部凝集,三排为红细胞对照,红细胞应全部沉降.三排为红细胞对照,红细胞应全部沉降.以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价效价,抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价,用2n表示2n表示.表示.血凝抑制试验流程实验二目的意义:目的意义:病毒的鸡胚培养了解禽源病毒鸡胚培养的意义及用途掌握病毒鸡胚培养的基本方法基本原理:基本原理:鸡胚培养是培养某些病毒常用方法,此方法可用于某些病毒的分离,鸡胚培养是培养某些病毒常用方法,此方法可用于某些病毒的分离,增殖,毒力滴定,中和试验及生产疫苗等.病毒接种鸡胚的途径有多种,增殖,毒力滴定,中和试验及生产疫苗等