人源性抗FGF-2中和性抗体的筛选,表达及鉴定的中期报告.docx
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人源性抗FGF-2中和性抗体的筛选,表达及鉴定的中期报告本实验旨在筛选出人源性抗FGF-2中和性抗体,并进行表达和鉴定。1.筛选抗体(1)制备FGF-2。将FGF-2的cDNA克隆到表达载体中,转入E.coli中进行表达和纯化。通过蛋白质印迹和ELISA等方法鉴定其纯度。(2)制备抗原。将纯化后的FGF-2进行适当浓度的离心,将上清液作为抗原。(3)免疫斑点方法筛选中和性抗体。将抗原涂在nitrocellulose膜上,然后将兔子的血清滴于膜上制成免疫斑点。通过中和试验筛选出具有高中和活性的抗体。2.抗体表达(1)将筛选出的抗体的重链和轻链的DNA序列克隆到表达载体中。转入CHO细胞中进行表达。(2)通过Westernblot和ELISA等方法鉴定表达的抗体的纯度及活性。3.抗体鉴定(1)通过ELISA等方法鉴定抗体的特异性和亲和力。(2)通过免疫组化等方法验证抗体的应用价值。目前,我们已经成功筛选出具有中等强度的中和活性的抗FGF-2抗体,并进行了表达和鉴定。接下来将进一步提纯和优化抗体,并深入研究其作用机制和应用价值。