银杏GbGGPPS基因的克隆鉴定及其遗传转化体系的建立的开题报告一、研究背景和意义银杏是属于裸子植物中的银杏科，分布广泛，其种子具有重要的药用价值。银杏秋叶赏，冬果食，叶和种子是制药的重要原料，具有良好的甘露糖降血压、抗血小板聚集、扩张血管、增强脑部血液循环等药用价值，是近年来备受关注的中药材。植物基因工程技术为银杏的遗传改良提供了一种新的途径。其中，GbGGPPS（银杏萜内酯合成酶）基因编码银杏叶中的酶，参与银杏叶中的萜内酯生物合成。该基因的研究对银杏的遗传改良和抗病抗逆作用的研究具有重要的意义。因此，本研究将克隆银杏GbGGPPS基因并建立其遗传转化体系，以提高银杏的养分含量和抗逆性能，促进银杏产业的发展。二、研究内容和方法本研究的主要内容包括以下三个方面：1.克隆银杏GbGGPPS基因并进行鉴定通过PCR扩增技术，从银杏叶片中提取总RNA，进行逆转录反应合成cDNA，再利用半定量PCR方法进行克隆GbGGPPS基因的扩增，将目的片段进行回收纯化后进行测序，以确定GbGGPPS基因的序列信息。同时，通过生物信息分析软件进行基因结构和蛋白质结构的分析，为后续功能分析打下基础。2.构建基于GbGGPPS基因的遗传转化载体利用GbGGPPS基因的序列设计引物，扩增目的片段，并进行酶切，同时构建携带水仙素甲醛合成酶基因（HSP70P-AgMAMT）和选殖标记基因nptII的高效植物表达载体，将目的片段插入表达载体中，构建基于GbGGPPS基因的遗传转化载体。进行质粒酶切和DNA测序，以确保载体设计的准确性。3.对银杏进行遗传转化和分子生物学研究将载体构建转化大白菜白头葱（onion）和悬铃木种子等基因载体，采用基因枪、农杆菌介导和微型插入法等不同遗传转化方式，对银杏进行遗传转化，筛选转化成功的植株并鉴定，通过RT-PCR技术进行基因的表达模式和量的分析。同时，对转化后的植株进行抗逆性筛选，比较抗逆性和非转化对照组的差异。三、预期研究结果本研究预期能够成功克隆银杏GbGGPPS基因，基于该基因建立可行的银杏遗传转化体系，通过遗传转化将GbGGPPS基因导入银杏，获得具有抗逆性和高养分含量的银杏新品种，并对其进行深入的分子生物学研究，以期为银杏高效种植与种质资源的改良提供技术支持，同时也对银杏的保护与开发提供科学依据。