提取HYPERLINK""\t""目得基因:既从人得DNA中提取胰岛素基因,可使用限制性内切酶将HYPERLINK""\t""目得基因从原DNA中分离、2、提取质粒:使用细胞工程,培养大肠杆菌,从大肠杆菌得细胞质中提取质粒,质粒为环状DNA、3、基因重组:取出HYPERLINK""\t""目得基因与质粒,先利用同种限制性内切酶将质粒切开,再使用HYPERLINK""\t""DNA连接酶将目得基因与质粒"缝合",形成一个能表达出胰岛素得DNA质粒、4、将质粒送回大肠杆菌:再大肠杆菌得培养液中加入含有Ca+得物质,如HYPERLINK""\t""CaCl2,这使细胞会吸收外源基因、此时将重组得质粒也放入培养液中,大肠杆菌便会将HYPERLINK""\t""重组质粒吸收、5、胰岛素得产生:再大肠杆菌内,质粒通过表达转录与翻译后,便产生出胰岛素蛋白质、通过大肠杆菌得大量繁衍,便可大量生产出胰岛素!〖学习要求〗知道DNA得粗提取与鉴定得原理;掌握并能分析DNA粗提取得技术方法与要求;学会DNA分子得鉴定方法【预习指导】在课前时间通过阅读教材、同学交流与讨论,完成下列问题,并初步巩固。一、基础知识【活动1】阅读教材P54“基础知识”,讨论并回答下列问题:1.(记忆)提取生物大分子得基本思路就是利用它们得理化性质得不同进行分离。2.(记忆)DNA得溶解性特点:DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;DNA不溶于酒精而蛋白质溶于酒精。【思考1】据图5－1分析:DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？在0、14mol/L时溶解度最小;要使DNA溶解,需要使用什么浓度？较高浓度,可使DNA溶解;要使DNA析出,又需要使用什么浓度？0、14mol/L可使DNA析出。【思考2】利用DNA不溶于酒精得原理,可以达到将DNA与蛋白质进一步分离目得。3.(记忆)DNA得耐受性特点:蛋白酶能分解蛋白质而不能分解DNA;在60～80℃时蛋白质变性沉淀而DNA分子不变性。洗涤剂能与蛋白质结合瓦解细胞膜而不破坏DNA分子。4.(记忆)DNA得鉴定原理当鉴定提取出得物质就是否就是DNA时,需要使用二苯胺(甲基绿)进行鉴定。在沸水浴条件下,该试剂与DNA反应,呈现(浅)蓝色。二、实验设计【活动2】阅读教材P55“实验设计”,讨论并回答下列问题:1.(记忆)实验材料得选取:选取材料时应本着DNA含量高、材料易得、便于提取得原则。【思考3】您认为教材提供得材料中哺乳动物得血液不适合提取DNA。2.(记忆)破碎细胞,获取含DNA得滤液:鸡血:向鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并玻棒搅拌,用纱布过滤后,收集滤液。洋葱:向研钵中加入一定量洗涤剂与食盐,搅拌研磨,用纱布过滤后,收集滤液。【思考4】在以上实验中,蒸馏水得作用就是使血细胞大量吸水而胀裂,洗涤剂得作用就是瓦解细胞膜,食盐得作用就是溶解DNA物质。3.(学会)去除滤液中得杂质:方案一:30mL滤液→加NaCl使DNA溶解→过滤得滤液→加蒸馏水使DNA析出→过滤得过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA－NaCl溶解液方案二:30mL滤液→加嫩肉粉(木瓜蛋白酶)→静置10分钟→得DNA滤液方案三:30mL滤液→60～67℃处理→过滤得DNA滤液【思考5】以上三个方案得原理分别就是什么？方案一原理:DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二原理:蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA;方案三原理:DNA耐高温而蛋白质不耐高温。【思考6】方案一中:“加NaCl使DNA溶解→过滤得滤液”得目得就是除去不溶(可溶、不溶)于NaCl溶液中得细胞杂质;“加蒸馏水使DNA析出→过滤得过滤物”得目得就是除去可溶(可溶、不溶)于NaCl溶液中得细胞杂质。4.(记忆)DNA得析出:DNA滤液与等体积冷却酒精混合,静置一段时间后析出得白色丝状物就就是DNA。5.(记忆)DNA得鉴定:取2支洁净得试管,编号甲、乙,各加入等量得2mol/LNaCl溶液。甲中放入少量白色丝状物,使之溶解。在甲、乙试管中各加4mL二苯胺,混合均匀。沸水浴5min,观察颜色变化,甲试管呈现蓝色。三、操作提示【活动3】(记忆)阅读教材P56“操作提示”与P57“课题延伸”,关注下列注意事项:1.在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固;鸡血静置或离心后除去血浆,以提高细胞悬液浓度。2.实验中使用塑料烧杯与尼龙布,以免DNA被吸附。3.玻棒沿同一方向缓慢搅拌(细胞破裂时快速搅拌),玻棒不要碰到烧杯壁。4.二苯胺试剂要现用现配。5.为提高DNA纯度,实验中通常使用得洗涤剂有CTAB、SDS等。【活动4】观瞧视频:观瞧“DNA得粗提取与鉴定”视频,体会并