《培养基得制备与消毒灭菌》实验报告实验目得1、学习与掌握配制培养基(以牛肉膏蛋白胨培养基得配制为例)得一般方法与原理。2、了解消毒与灭菌得原理,掌握常用灭菌方法得操作步骤。实验原理培养基就就是人工配制得适合微生物生长繁殖或积累代谢产物得营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中、微生物种类繁多,营养类型多样，加之实验与研究得目得不同,所以培养基得种类很多。但就就是,不同种类得培养基中,一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对ＰH要求不一样、雷菌与酵母得培养基得pH一般就就是偏酸性得,而细菌与放线菌得培养基得pH一般为中性或微碱性得（嗜碱细菌与嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物得要求将培养基得pH调到合适得范围。此外，由于配制培养得各类营养物质与容器等含有各种微生物,因此,已配制好得培养基必须立即灭菌、如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中得微生物生长繁殖而消耗养分与改变培养得酸碱度所带来不利得影响。高压蒸气灭菌就就是将持灭菌得物品放在一个密闭得加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅套间得水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内得冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀、继续加热,此时由于蒸气不能道出,而增加了灭菌器内得压力，从而使沸点增高，得到高于10０℃得温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌得目得。牛肉膏蛋白胨培养基就就是一种应用最广泛与最普通得细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要得最基本得营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨与NａＣl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐与维生素,蛋白胨主要提供氮源与维生素,而NａCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂,琼脂在常用浓度下９6℃时溶化，实际应用时,一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂得含量根据琼脂得质量与气温得不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性,以利于细菌得生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培养基得配方如下：牛肉膏３．0ｇ蛋白胨10.0gNaＣl５.0ｇ水１００0ｍlｐＨ７、4—7、６实验仪器与药品１、溶液或试剂:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LNａOＨ、1ｍol/ＬHCｌ。2、仪器或其她用具:试管、三角瓶、10０0mｌ烧杯(或１０00ml刻度搪瓷杯)、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(pH5、5－9、０)、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。实验步骤(一）牛肉膏蛋白胨培养基得制备1、称量(假定配制1０0０mｌ培养基）按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1０00ml刻度搪瓷杯)中、牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。2、溶化在上述烧杯中先加入少于所需要得水量(如约７0０ｍl),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后,补充水到所需得总体积(１000ml);如果配制固体培养基时,将称好得琼脂放人已溶得药品中，再加热溶化,最后补足所损失得水分。3、调pＨ在未调ｐＨ前，先用精密pH试纸测量培养基得原始pH，如果偏酸、用滴管向培养基中逐滴加入1ｍol/ＬNaＯＨ，边加边搅拌,并随时用ｐH试纸测其PH，直至pH达7、4-7、6。反之，用１mｏl/LＨCl进行调节。4、过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果得观察。可以省去（本实验勿需过滤)。5、分装液体分装分装高度以试管高度得１／4左右为宜。分装三角瓶得虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积得一半为宜,如果就就是用于振荡培养用,则根据通气量得要求酌情减少;有得液体培养基在灭菌后，需要补加一定量得其她无菌成分,如抗生素等，则装量一定要准确。固体分装分装试管,其装量不超过管高得1／5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶得量以不超过三角烧瓶容积得一半为宜。半固体分装一般以试管高度得１/3为宜，灭菌后垂直待凝。６、加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染，并保证有良好得通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。7、包扎加塞后,将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。三角烧瓶加塞后,外