实验报告灭菌与消毒院系：专业班级:姓名：学号：同组人：学号：指导老师：实验日期:实验组号：实验目的：1．了解干热灭菌的原理和应用范围。学习干热灭菌的操作技术。2．了解高压蒸气灭菌的基本原理及应用范围。学习高压蒸气灭菌的操作方法。3．了解紫外线灭菌的原理和方法。实验原理：干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表1），，二是湿热的穿透力比干热大（表2），，三是湿热的蒸气有潜热存在。1g水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。表1蛋白质含水量与凝固所需温度的关系卵白蛋白含水量/%30分钟内凝固所需温度/℃50562574～801880～9061450160～170表2干热湿热穿透力及灭菌效果比较透过布层的温度/℃温度/℃时间/h灭菌20层10层100层干热130-4867270．5不完全140湿热105.33101101101完全在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见（表3）表3灭菌锅留有不同分量空气时，压力与温度的关系压力数全部空气2/3空气1/2空气1/3空气空气全不MpaKg/cmIb/排出时的排出时排出时排出时排出时的2in2温度/℃的温度的温度的温度温度/℃/℃/℃/℃0.030.355108.81009490720.070.7010115.6109105100900.101．0515121.31151121091000.141.4020126.21211181151090.171.7525130.01261241211150.212.1030134.6130128126121现在法定压力单位己不用磅和kg/cm2表示，而是用Pa或bar表示，其换算关系为：1kg/cm2=98066.5Pa；1Ib/in2=6894.76Pa.一般培养基用0.1Mpa（相当于15Ib/in2或1.05kg/cm2），121.5℃，15～30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基用0.06Mpa（8Ib/in2或0.59kg/cm2）112.6℃灭菌15min，但为了保证效果，可将其他成分先行121.3oC,灭菌20min,然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的培养基以0.1Mpa，121.5℃灭菌20min即可，而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa，122℃灭菌30min。实验中常用的非自控高压蒸气灭菌锅有卧式和手提式二种，其结构和工作原理相同，本实验以手提式高压蒸气灭菌锅为例，介绍其使用方法，有关自控高压蒸气灭菌锅（autoclave）的使用可参照厂家说明书。紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O氧化生成臭氧（O）或使水（HO）氧化生成过232氧化氢（HO）。O和HO均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于22322无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m