细胞培养基本概念有限细胞系与连续细胞系：正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后就会丧失增殖的能力，这是一个由遗传决定的事件，被称为衰老；这种只能分裂有限的次数的细胞系被称为有限细胞系。但是，一些细胞系会通过“转化”的过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生，也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力后，就成为连续细胞系。培养条件：细胞培养的人工环境必须包括合适的容器，容器中含有一定的基质或介质，为细胞提供必需的营养素(氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质)、生长因子、激素和气体(O2、CO2)，并可调节其物理化学环境(pH、渗透压、温度)。为什么要细胞培养？细胞培养的应用细胞培养实验室细胞培养设备细胞培养通风橱通过维持工作区域上方稳定、单向的HEPA过滤空气流动，保护工作环境免受灰尘及其他空气污染物污染。准备与灭菌灭菌方式的选择灭菌方式的选择玻璃器皿、金属器皿的清洗和灭菌塑料制品的清洗和灭菌水的制备和灭菌PBS的制备配置完全培养基无菌操作技术无菌操作技术无菌工作区域——洁净台的使用在通风橱中部开阔区域放置细胞培养容器移液器置于右前方易于取用的地方试剂和培养基置于右后方，便于吸取试管架置于中后部，用于固定其他试剂小型容器置于左后部，用于盛放废液良好的个人卫生外来试剂、培养基和培养物的无菌细胞培养箱的无菌细胞培养中的无菌操作细胞培养中的无菌操作小结污染酵母：培养物被酵母污染后也会变得浑浊，但pH值变化极小，污染严重时pH值才会升高。在显微镜下，酵母呈单个卵圆形或球形颗粒，有些会芽生出较小的颗粒。图为293细胞被酵母污染。支原体：是一种没有细胞壁的简单细菌，被认为是能够自我复制的最小的生物。由于体积极小(一般小于1微米)，支原体的检测十分困难。可在培养物中持续存在造成慢性支原体感染，而不会导致细胞死亡，表现为：细胞增殖速度降低、饱和密度下降以及悬浮培养物凝集；抗生素的使用细胞培养基本知识—获取细胞培养环境血清：是基础培养基中极为重要的细胞生长和粘附因子、激素、脂质和矿物质来源。此外，血清还可调节细胞膜通透性，并可作为向细胞内运送脂质、酶、微量营养素和微量元素的载体。但是，在培养基中添加血清也有一些缺点，包括：成本高，存在标准化、特异性和变异性问题，具有一些不良效应，如：可促进或抑制某些细胞的生长或功能。pH值：大多数正常的哺乳动物细胞系都能在pH值为7.4的环境中生长良好，而且不同细胞株间差异极小。但是，目前发现有些转化细胞系在轻度偏酸性的环境(pH7.0–7.4)中生长较好，而有些正常的成纤维细胞系更适合轻度偏碱性的环境(pH7.4–7.7)。可通过添加有机缓冲盐(例如：HEPES)或者二氧化碳-碳酸氢盐缓冲盐来缓冲细胞培养中的pH值变化。二氧化碳：通常使用浓度为5%的二氧化碳来控制培养体系的pH值，大多数细胞二氧化碳浓度在4–10%之间。温度：大多数人和哺乳动物细胞系在36℃至37℃下具有最佳生长状态。禽类细胞系在38.5°C时具有最佳生长状态。虽然此类细胞也可在37°C下培养，但其生长速度会变慢。补充：CO2使用中的问题培养细胞的形态培养细胞的形态换液换液步骤传代传代步骤传代步骤细胞的冻存冻存步骤冻存细胞使用管理细胞转染基本知识什么是转染？为什么要做转染实验？转染技术的分类瞬时转染稳定转染病毒介导的稳定细胞株构建影响转染效率的因素有很多，细胞株本身的特性和活性，细胞培养条件，转染的DNA或RNA的质量，转染方法，转染试剂的选择等。我们在实验中最常用的方法是脂质体转染，利用脂质体转染法最重要的就是减小脂质体的毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染时间的长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要因素，通过实验摸索的合适转染条件对于转染效率的提高有巨大的作用。影响转染效率的因素转染试剂细胞状态细胞密度血清抗生素DNA质量载体构建主流转染试剂推荐