肠道病毒EV71和CVA16嵌合型VLP疫苗研究及CVA16单克隆抗体制备的开题报告一、研究背景及意义肠道病毒（Enterovirus,EV）是一类单链RNA病毒，包含数十个亚型，其感染可导致手足口病（Hand,footandmouthdisease,HFMD）、腮腺炎、心肌炎、脑膜炎等多种疾病。其中，EV71和CVA16是最常见的两种病毒。自1998年以来，中国境内便持续爆发HFMD疫情。2019年全国累计报告HFMD疫情超过766万例，其中EV71和CVA16是主要致病因素。因此，开发有效的疫苗和治疗手段，对于控制HFMD及其相关疾病的流行具有重要意义。二、研究内容本研究旨在探究一种新型的肠道病毒EV71和CVA16嵌合型VLP（Virus-likeparticle）疫苗的免疫效果，并在此基础上制备CVA16的单克隆抗体。1.肠道病毒EV71和CVA16嵌合型VLP疫苗的构建该疫苗中，采用EV71和CVA16两种病毒抗原蛋白的基因序列进行克隆，并在其中间部分连接PET21a载体上的序列。然后，将其转化到大肠杆菌BL21中，经过表达、纯化、结晶等过程，构建出EV71和CVA16嵌合型的VLP疫苗。通过免疫小鼠实验证明，该疫苗具有较好的免疫原性和免疫保护效果。2.制备CVA16单克隆抗体为制备CVA16单克隆抗体，首先需要提取CVA16的抗原蛋白，并利用其制备小鼠的免疫原液。然后，将其与小鼠脾细胞融合，得到杂交瘤细胞。最后，通过筛选和限制性扩增等方法，获得CVA16的单克隆抗体。三、研究意义及创新点本研究所构建的嵌合型VLP疫苗可以同时诱导对EV71和CVA16两种病毒的免疫保护，从而有效地预防和控制HFMD等疾病的发生。此外，制备的CVA16单克隆抗体可以用于病毒检测、疫苗质量控制、临床治疗等多个领域，具有广阔的应用前景。四、研究方法和流程1.EV71和CVA16嵌合型VLP疫苗的构建a.克隆EV71和CVA16的抗原基因序列b.连接PET21a载体c.转化到大肠杆菌BL21中d.进行表达、纯化和结晶2.CVA16单克隆抗体的制备a.提取CVA16的抗原蛋白b.制备小鼠的免疫原液c.将脾细胞与免疫原液融合d.筛选杂交瘤细胞并限制性扩增五、研究预期结果1.成功构建出具有较好免疫原性和保护效果的EV71和CVA16嵌合型VLP疫苗2.制备出高亲和力的CVA16单克隆抗体3.为HFMD的防控提供新的技术和理论支持六、研究的局限性和不足之处1.实验条件和设备的局限性2.细胞免疫和体免疫等方面的认识不够全面3.数据分析和结果解读需要更加深入的探讨七、研究的参考文献1.ZhangY,WangJ,GuoW,etal.Developmentandevaluationofanovelenterovirus71genotype-specificbivalentrecombinantproteinvaccinewiththerapeuticeffect[J].PlosOne,2015,10(5):e0127940.2.WongCP,ZhangC,ChuJJH.Developmentofamonoclonalantibodyagainstenterovirus71usinganepitope-guidedapproach[J].Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications,2017,494(3-4):720-725.3.LiJ,XuY,ShenL,etal.Establishingawell-characterizedmonoclonalantibodypanelforspecificdetectionofenterovirus71[J].PloSone,2014,9(11):e111917.