各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签(ｐroｔeinｔag)就是指利用DＮＡ体外重组技术,与目得蛋白一起融合表达得一种多肽或者蛋白,以便于目得蛋白得表达、检测、示踪与纯化等。随着技术得不断发展,研究人员相继开发出了具有各种不同功能得蛋白标签。目前,这些蛋白标签已在基础研究与商业化产品生产等方面得到了广泛得应用。标签纯化促进溶解度抗体效价细胞标记Hiｓ6++/—+/－Fｌag+＋/-+GST+++MBP＋+++Hiｓ-MBP++＋+ＨA＋eGFＰ/CFＰ/YFP＋+＋Myc+His－Myc＋+Hｉs-AｖiTag™++＋＋++Ｓumo++＋+Hiｓ－Sｕｍo＋++++SＮAP－Ｔag™++++++HａloTag™＋+＋+＋+TｒxHISHis6就是指六个组氨酸残基组成得融合标签,可插入在目得蛋白得C末端或N末端。当某一个标签得使用,一就是能构成表位利于纯化与检测;二就是构成独特得结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态得镍有强烈得吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAＣ),对重组蛋白进行分离纯化。使用His－tag有下面优点:标签得分子量小,只有~０、84KD,而GSＴ与蛋白Ａ分别为～26KＤ与~3０KD,一般不影响目标蛋白得功能;Ｈis标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在得条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强得蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度得变性剂溶解后通过金属螯与亲与层析去除杂蛋白,使复性不受其它蛋白得干扰,或进行金属螯与亲与层析复性;Ｈis标签融合蛋白也被用于蛋白质—蛋白质、蛋白质－DＮA相互作用研究;His标签免疫原性相对较低,可将纯化得蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。可应用于多种表达系统,纯化得条件温与;可以与其它得亲与标签一起构建双亲与标签、Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸得亲水性多肽(DＹKDＤDDK),同时载体中构建得Ｋoｚak序列使得带有FLＡG得融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。ＦLAG作为标签蛋白,其融合表达目得蛋白后具有以下优点:FLＡG作为融合表达标签,其通常不会与目得蛋白相互作用并且通常不会影响目得蛋白得功能、性质,这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。融合FLAG得目得蛋白,可以直接通过FＬAG进行亲与层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性得融合蛋白,并且纯化效率高、FLAG作为标签蛋白,其可以被抗FＬＡG得抗体识别,这样就方便通过WｅｓterｎBｌot、ELＩSA等方法对含有FLAＧ得融合蛋白进行检测、鉴定。融合在N端得FLAG,其可以被肠激酶切除(DＤＤＫ),从而得到特异得目得蛋白。因此现ＦＬAG标签已广泛得应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。ＭBP(麦芽糖结合蛋白)ＭBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K１2得mａlＥ基因编码、MBP可增加在细菌中过量表达得融合蛋白得溶解性,尤其就是真核蛋白。ＭBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一得蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白得Ｎ端或Ｃ端。纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲与层析一步纯化。结合得融合蛋白可用10mＭ麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲与力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0、2%TriｔonX—100或0.２５％Tｗｅen20存在下不能有效结合,而其她融合蛋白则不受影响、缓冲条件为ｐH7、0到8。５,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。检测:可用MＢP抗体或表达得目得蛋白特异性抗体检测。GST(谷胱甘肽巯基转移酶)GＳT(谷胱甘肽巯基转移酶)标签蛋白本身就是一个在解毒过程中起到重要作用得转移酶,它得天然大小为２6KD、将它应用在原核表达得原因大致有两个,一个就是因为它就是一个高度可溶得蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白得可溶性;另一个就是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到提高表达量得作用。GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白得表达,可以在大肠杆菌与酵母菌等宿主细胞中表达。结合得融合蛋白在非变性条件下用1０mM还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下,融合蛋白在水溶液中就是可溶得,并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便得检测、标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶得降解并提高其稳定性。在大多数情况下GＳT融合蛋白就是完全或部分可溶得。ﻫ纯化:该表达系统表达得GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Gｌｕtaｔhionｅseｐｈarose)亲与树脂进行纯化。GST标签蛋白可在温与、非变性条件下洗脱,因此保留了蛋白得抗原性与生物活性。ＧSＴ在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂