转录组测序常见问题摘自华大科技官网http://www.bgitechsolutions.cn/1.提取人、植物、动物、酵母等来源的RNA，是否有指导性方法?推荐用何种方法进行？答：RNA提取质量的好坏主要取决于样品本身的质量即新鲜程度。除此之外，针对大多数的动植物组织样品，Invitrogen公司的Trizol试剂都能获得较好的提取效果，请客户参照其说明书进行；对于多糖含量特别丰富的植物组织，如棉花，铁树，兰花等，可采用杭州博日产的pBIOZOL试剂或CTAB‐PVP结合LiCl沉淀进行提取；对于脂肪组织，可采用QIAGEN公司的RNeasylipidminikit进行提取。2.原核生物都可以做转录组测序分析吗？答：都可以。真核生物是利用磁珠调离法将带有poly(A)的mRNA分离出，而原核生物则是去核糖体RNA。3.测序失败的原因有哪些？测序成功的标准是什么？答：测序失败的原因是多方面的，设备、耗材、操作等方面都会对测序的结果造成影响。我们的设备和耗材质量稳定，工作人员均接受过专业的培训。测序成功标准：reads数达标，错误率低，Q20高等指标。4.平行样品是否需要安排在同一机器同一flowcell上机？答：不需要。平行样品是指建库的时候尽量保证平行，信息分析的时候平行分析。5.Rawdata如何读取？为什么不提供原始图像数据和中间过程文件？答：数据文件以txt文本格式为主。对于Windows用户，推荐使用Editplus或UltraEdit作为浏览程序，否则会因文件过大造成死机。Unix或Linux系统比较适于浏览较大的文本文件。由于Illumina更新了pipeline，测序过程中生成的图像文件将实时转化为中间过程文件，这一步完成后图像文件将自动删除，得到中间过程文件（此文件为二进制文件，只有在Illumina机器上才能读取，通常不保留），在Illumina分析软件下将转化为序列文件。即所说的rawdata。目前各公共数据库接受fastq文件，所以我们提供的rawdata都是fastq文件。