细胞培养基质量标准及检验方法中国医药生物技术协会二0一一年四月编写说明一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。二、本标准以《中国药典》2010版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T3935-2007）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定，增加了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。三、本标准分为细胞培养基检验项目和每个项目的检验方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。四、结果评定依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检验，所有项目均符合标准要求，判定该样品为合格；若有一项不符合标准要求，则判定样品为不合格。2细胞培养基质量标准及检验方法一、细胞培养基质量标准细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。表1技术要求检验项目限度要求检验方法中华人民共和国药典2010年澄清度澄清版二部附录ⅨB进行。中华人民共和国药典2010年pH值（每升标示量/L）pH允许偏差范围为±0.30版附录ⅥH进行。中华人民共和国药典2010年渗透压（mOsm/kgH2O）渗透压允许偏差范围为±5％版二部附录ⅨG渗透压摩尔浓度测定法进行。按中华人民共和国药典2010干燥减量的质量分数（%）≤5.0年版二部附录ⅧL干燥失重测定法进行。按中华人民共和国药典2010细菌内毒素（EU/ml）≤10年版附录ⅪE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。细菌数按中华人民共和国药典2010≤200（CFU/g）年版附录ⅪJ微生物限度检微生物限度查法进行，检查项目为细菌霉菌数≤50数、霉菌数。检查法采用平皿（CFU/g）法。成纤维样贴壁生长，形态正常无细胞形态变异按中华人民共和国化工行业细胞生长试验标准《哺乳类动物细胞培养培养72h细胞数量不低于1×（vero细胞）5基》HG/T3935-2007第7.7细胞数量10cells/ml；继续维持48h细5条进行。胞数量不低于1×10cells/ml依据中华人民共和国药典2010年三部附录ⅧI牛血清牛血清白蛋白不得检出白蛋白残留量测定法进行，不得检出牛血清白蛋白。依据中华人民共和国药典2010年三部附录ⅨA抗生素抗生素不得检出残留量测定法进行，不得检出青霉素、链霉素及庆大霉素。二、检验方法除非另有说明，检验中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2010年版中规定的纯化水。2.1澄清度的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅨB进行。32.2pH值的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。2.3干燥减量的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅦL干燥失重测定法进行。2.4渗透压的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml,搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。2.5细菌内毒素的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅫE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。2.6微生物限度的测定按中华人民共和国药典2010年三部附录ⅫG微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。2.7细胞生长试验2.7.1贴壁型细胞生长试验2.7.1.1方法提要1)本试验所用容器具及溶液均为无菌，试验操作过程均为无菌操作。2)细胞在37℃恒温条件下，在含体积分数3%或10%的小牛血清的细胞培养液中生长72h，观察细胞形态并进行细胞计数；细胞生长72h后，更换不含小牛血清的细胞培养液，继续培养48h，观察细胞形态并进行细胞计数。2.7.1.2试剂和材料1)牛血清：符合中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅩⅢD。2)平衡盐溶液：称取氯化钾0.2g，精确至0.01g；无水磷酸二氢钾0.2g，精确至0.01g；氯化钠8.0g，精确至0.01g；无水磷酸氢二钠1.15g，精确至0.001g；加纯化水1000ml，混匀，测pH值，pH值