异烟肼、利福平对小鼠胆汁酸转运体Ntcp、Bsep的表达影响研究的任务书任务书一、研究背景胆汁酸是体内唯一有机阴离子的外源性成分，胆汁酸转运体Ntcp与Bsep负责调节胆汁酸在肝脏和小肠间的平衡，维持胆汁酸的稳态。异烟肼和利福平是临床上常用的抗结核药物，但它们对胆汁酸转运体的影响尚未确定。因此，研究异烟肼和利福平对小鼠胆汁酸转运体Ntcp、Bsep的表达影响，对于了解药物对胆汁酸代谢的影响，具有重要的理论和应用价值。二、研究内容本次研究的目的是探讨异烟肼和利福平对小鼠胆汁酸转运体Ntcp、Bsep的表达影响。具体研究内容如下：1、构建小鼠模型使用健康的C57BL/6小鼠，将小鼠随机分为对照组、异烟肼组和利福平组。对照组不予处理，异烟肼组和利福平组给予相应剂量的异烟肼和利福平，每组10只小鼠，连续给药两周。2、采集样本在连续两周的处理后，采集小鼠肝脏和小肠组织，获取组织切片和RNA样本。3、检测胆汁酸转运体Ntcp和Bsep的表达通过实时荧光定量PCR技术检测小鼠胆汁酸转运体Ntcp和Bsep的表达。利用免疫组化技术确定不同药物组处理后Ntcp和Bsep的蛋白表达水平。4、分析数据采用SPSS22.0统计软件对数据进行分析。三、研究意义1、探讨异烟肼和利福平对小鼠胆汁酸转运体Ntcp、Bsep的表达影响，为临床用药提供了有益的参考依据。2、进一步深入了解异烟肼和利福平对胆汁酸代谢及分泌的影响，对于预防药物引起的毒副作用，具有一定的现实意义。3、为胆汁酸转运体的相关研究提供新的思路和方法，拓宽了胆汁酸代谢及其调节机制研究的视野。四、研究方法1、小鼠模型选用健康的C57BL/6小鼠，随机分为对照组、异烟肼组和利福平组。对异烟肼组和利福平组采用饮用水法给药，每天定时给予相应剂量的药物。2、组织采集在连续两周的处理后，采集小鼠肝脏和小肠组织，分别切片或取样。3、标本处理将组织切片或取样，加入离心管中，加入RNA保护剂，并迅速放入液氮中保存。4、RNA提取使用Trizol抽提试剂进行RNA提取，方法按其操作说明书进行。5、cDNA合成将提取的RNA加入M-MLV逆转录酶反应体系中，合成cDNA。6、PCR扩增采用实时荧光定量PCR技术进行检测。7、数据分析采用SPSS22.0统计软件对数据进行分析。五、参考文献1、BarattaF,PastoreM,FrigerioF,etal.MutationsinhumanBSEPaffectbilesaltexportpumplipidationandATPaseactivity[J].Hepatology,2015,61(4):1255-1265.2、HakakianN,SinghR.Bileacidtoxicitymodelforhepatocytes[J].JVisExp,2015(99):e52697.3、LiuY,BinW,WuK,etal.Substratebindingdomainresiduescontributingtosubstratespecificityofmultidrugandtoxiccompoundextrusiontransporters[J].MolPharm,2015,12(10):3662-3671.