DNA甲基化快速检测的新方法近年来，表观遗传学逐渐成为生命科学研究中的热点，而DNA甲基化作为表观遗传学中的重要组成部分，研究热度也持续升温。DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，可能存在于所有高等生物中。它参与了动物胚胎发育、遗传印迹和X染色体失活等过程，在基因表达的调控中具有重要作用，异常的DNA甲基化则可导致肿瘤等多种疾病的形成。随着对DNA甲基化研究的不断深入，各种各样的DNA甲基化检测方法被开发出来，以满足不同类型研究的要求。这些方法包括甲基化敏感的限制性内切酶、基因组DNA测序、甲基化特异PCR等等。对于后两种方法，研究的第一步就是开展重亚硫酸盐（bisulfite）处理。重亚硫酸盐将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶，于是能区分出甲基化位点，再结合测序或PCR等方法来检测。俗话说，好的开始是成功的一半，重亚硫酸盐处理这一步对实验的成败至关重要。然而，经典的重亚硫酸盐处理方法存在诸多缺陷。操作相当繁琐，耗时又费力。至于转化效率，就更难把握，有些转化不完全，直接造成假阳性结果，有些则会出现过度转化，影响检测的灵敏度，经常是忙了半天却没结果。为此，默克密理博公司近日推出一款极速重亚硫酸盐处理试剂盒（CpGenome™TurboBisulfiteModificationKit），让你体验极为快速的重亚硫酸盐转化。此款试剂盒不仅能提高实验速度，还能保证检测的灵敏度和转化效果。体验极速转化使用这一款极速重亚硫酸盐处理试剂盒，从DNA样品处理到转化后的高纯DNA只需90分钟，而传统的重亚硫酸盐处理需要18个小时，市场上其他试剂盒也大概需要6个小时。为何如此之快？默克密理博的秘密就是他们的一款受专利保护的处理试剂，能在很短时间内将未甲基化的胞嘧啶彻底转化。同时这种试剂对DNA的伤害又极小，不像通常的高盐、高温以及低pH等极端条件会导致DNA高度片段化。至于这种处理试剂的成分，我们当然无从得知，只知道它是由两种试剂混合而成。有了它，转化即可在40分钟内完成，耗时仅为其他方法的1/10。速度与效果、灵敏度并存也许你又有点担心转化的效果，快是快了，但会不会转化不完全呢？其实，这款试剂盒的修饰转化效率高达99.9%。不信，请看图1。1ng基因组DNA用极速重亚硫酸盐处理试剂盒处理后，再用CpGWiz®MGMT引物对进行定量PCR。结果显示，极速重亚硫酸盐处理试剂盒在更短的时间内达到与其他同类商业化产品一样的结果。出色的效果，双倍的速度。1ng基因组DNA分别用极速重亚硫酸盐处理试剂盒和Z品牌的试剂盒处理后，再用CpGWiz®MGMT引物对进行定量PCR。极速重亚硫酸盐处理试剂盒的时间是Z品牌试剂盒消耗时间的一半。而两者效果则相近。避免过度转化有时，过度转化也是一个大问题。不过，极速重亚硫酸盐处理试剂盒可有一双雪亮的眼睛，只会彻底转化非甲基化的胞嘧啶，而丝毫不会转化甲基化的胞嘧啶！研究人员做过实验，用极速重亚硫酸盐处理试剂盒处理甲基化DNA（蓝字）和非甲基化DNA（绿字），然后用CpGWiz®MGMT引物对进行测序。结果显示，在所有检测的样本中，极速重亚硫酸盐处理试剂盒仅特异地彻底地转化了非甲基化胞嘧啶，而完全没有转化甲基化胞嘧啶。这个特点最大限度地维护了我们实验结果的真实性和准确性。表现始终如一无论是1ngDNA，还是1μgDNA样品，极速重亚硫酸盐处理试剂盒都一视同仁，产生灵敏且可靠的重亚硫酸盐转化结果。不同量的甲基化DNA用极速重亚硫酸盐处理试剂盒处理后，用50μl（1μg和100ng样品）或25μl（10ng和1ng样品）洗脱液洗脱后，用CpGWizMGMT甲基化引物对进行定量PCR，然后比较转化结果。如图3所示，从1ng到1μgDNA样品均有可靠的转化结果。从1ng到1μgDNA样品均有灵敏且可靠的重亚硫酸盐转化结果。点击索取极速重亚硫酸盐处理试剂盒的详细资料针对上游的甲基化DNA富集，默克密理博还推出了配套使用的甲基化DNA富集试剂盒（CpGMethylQuest™www.cellservice.cnDNAIsolationKit），能简单、高效、快速地富集甲基化DNA。它采用GST-MBD2b蛋白预包被的磁珠来富集甲基化DNA，简单又快速，只需2小时即可完成。CpGMethylQuestMBD蛋白特异性结合甲基化DNA，而不与非甲基化或半甲基化DNA结合，保证了结果的特异性。此外，默克密理博还提供丰富的表观遗传学研究工具，包括染色质免疫沉淀ChIP试剂盒、RNA免疫沉淀RIP试剂盒、端粒酶检测试剂盒和多种表观遗传学抗体等，为大家提供了表观遗传学的整体解决方案。如果你有表观遗传学方面的任何问题，欢迎登陆生物通和默克密理博共同打造的表观遗传学论坛。那里潜伏着很多高手，为你解惑答疑，也有丰富